[发明专利]一株变形假单胞菌exbB基因稳定沉默菌株及应用

说明书

本发明通过基因沉默技术构建了一株变形假单胞菌exbB基因稳定高效沉默菌株，然后通过人工感染实验确定exbB基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病性，并利用dual RNA‑seq技术对野生菌株和exbB基因稳定高效沉默菌株感染后的斜带石斑鱼脾脏的转录组数据进行分析，同时对宿主和病原菌的转录组数据进行研究，从转录组层面探讨exbB基因在变形假单胞菌与斜带石斑鱼互作中的功能，进而揭示了exbB基因对变形假单胞菌毒力的影响，尤其是从物质运输角度对变形假单胞菌毒力的影响。本发明所构建的菌株对斜带石斑鱼的致病力极显著下降，而且能够引起感染脾脏中变形假单胞菌和斜带石斑鱼转录组数据发生显著变化。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，更具体涉及一株具有研究变形假单胞菌致病机理价值的菌株。

背景技术

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼、斜带石斑鱼等海水养殖鱼类“内脏白点病”的病原菌，每年造成的直接经济损失超亿元。exbB基因编码TonB系统的激活因子(TonB-ExbB -ExbD)。早期研究表明，ExbB是ExbB -ExbD-TonB 复合物中最丰富的蛋白，能够稳定TonB和ExbD。TonB系统由固定在细胞膜上的ExbB-ExbD和周质蛋白TonB组成，它为依赖 TonB的外膜受体 (TBDTs)提供能量，并支持重要营养物质的积极运输，包括铁、血红蛋白、维生素B12和碳水化合物。铁在细菌致病性和宿主防御机制中发挥着重要作用，但这一作用往往被低估。在细菌-宿主相互作用中，对铁的争夺对感染结果至关重要。已有相关报道证实了TonB系统与菌株的毒力相关，但关于exbB基因的报道较少。因此, 探明变形假单胞菌exbB基因在病原-宿主互作中的功能能够揭示其对变形假单胞菌致病性的意义。

本发明通过基因沉默技术构建了一株变形假单胞菌exbB基因稳定高效沉默菌株，然后通过人工感染实验确定exbB基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病性，并利用dual RNA-seq技术对野生毒株和exbB基因稳定高效沉默菌株感染后的斜带石斑鱼脾脏的转录组数据进行分析，同时对宿主和病原菌的转录组数据进行研究，从转录组层面探讨exbB基因在变形假单胞菌与斜带石斑鱼互作中的功能，进而揭示了exbB基因对变形假单胞菌毒力的影响，尤其是从物质运输角度对变形假单胞菌毒力的影响。本发明所构建的变形假单胞菌exbB基因稳定高效沉默菌株对斜带石斑鱼的致病力极显著下降，而且能够引起感染脾脏中变形假单胞菌和斜带石斑鱼转录组数据发生显著变化，因此该菌株可用于研究变形假单胞菌的致病机理，特别是从病原-宿主互作以及物质运输角度研究变形假单胞菌的致病机理有着独特的优势。

发明内容

本发明的主要目的是提供一株变形假单胞菌exbB基因稳定高效沉默菌株，揭示exbB基因在转录组层面对变形假单胞菌毒力的影响，明确了该菌株的应用范围；

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：本发明提供的这株变形假单胞菌exbB基因稳定高效沉默菌株的构建技术路线及其功能，

一株变形假单胞菌exbB基因稳定沉默菌株，所述菌株命名为Pseudomonas plecoglossicida exbB-RNAi已于2019年10月31日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2019878，中国典型培养物保藏中心地址为中国武汉，武汉大学。

步骤一：通过比较转录组学分析发现exbB基因在变形假单胞菌脾脏内高表达；