[发明专利]一种提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法

权利要求书

1.一种提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1 取健康足月新生儿脐带，用加双抗的PBS冲洗，去除血管内的血液，用剪刀将脐带剪成3cm的小段，剥出里面的华通氏胶组织，将所得组织剪成1-2mm³的组织块，均匀铺至培养瓶中，加入α-MEM培养液后翻转培养瓶置于37℃，5%的CO₂培养箱中，1h后将培养瓶翻转，加入培养液，使培养液覆盖所有脐带组织块；

S2 待细胞长至培养瓶的80%时，用胰蛋白酶消化细胞，细胞消化完成后，将细胞进行计数，进行传代，每个150cm²培养瓶中不少于1×10⁶个细胞；

S3 细胞传至第4代时，将细胞进行流式检测，对细胞进行鉴定；

S4 当细胞扩增至融合度70%-80%时，使用注射用生理盐水更换培养液，12小时后，收集细胞上清待用，将细胞使用胰蛋白酶进行消化，收集细胞；将收集的细胞与细胞上清混合，进行低速离心，离心转速为500转-8000转/分钟，离心结束后收集上清，并进行过滤，去除细胞碎屑残留。

2. 根据权利要求1所述的提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法，其特征在于，步骤S1中所述培养液含10% FBS，100U/ml青霉素及100U/ml链霉素。

3.根据权利要求1所述的提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶的浓度为0.05%。

4.根据权利要求1所述的提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法，其特征在于，步骤S4中所述低速离心的转速为1000转-7000转/分钟。

5.根据权利要求1所述的提高间充质干细胞培养液中碱性成纤维细胞生长因子含量的方法，其特征在于，步骤S4中所述低速离心的时间为30分钟。