[发明专利]表达组合式荧光蛋白片段的载体及其应用

权利要求书

1.一种重组载体组合，包括第一重组载体、第二重组载体、第三重组载体和第四重组载体，

其中，第一重组载体含有第一荧光蛋白的第一片段的编码基因，第二重组载体含有第一荧光蛋白的第二片段的编码基因，第一荧光蛋白的第一片段和第二片段组成第一荧光蛋白；

第三重组载体含有第二荧光蛋白的第一片段的编码基因，第四重组载体含有第二荧光蛋白的第二片段的编码基因，第二荧光蛋白的第一片段和第二片段组成第二荧光蛋白；

其中，所述第一荧光蛋白和所述第二荧光蛋白能够产生荧光共振能量转移信号。

2.根据权利要求1所述的重组载体组合，其中，所述第一荧光蛋白为青色荧光蛋白，所述第二荧光蛋白为黄色荧光蛋白。

3.根据权利要求1所述的重组载体组合，其中，所述第一荧光蛋白为增强型青色荧光蛋白(ECFP)、mTurquoise2或mCerulean，所述第二荧光蛋白为增强型黄色荧光蛋白(EYFP)或Venus。

4.根据权利要求1所述的重组载体组合，其中，所述第一重组载体和所述第二重组载体通过分别将所述第一荧光蛋白的第一片段和第二片段插入载体的相同位点而得到，所述第三重组载体和所述第四重组载体通过分别将所述第二荧光蛋白的第一片段和第二片段插入载体的相同位点而得到。

5.根据权利要求1所述的重组载体组合，其中，所述第一荧光蛋白为mTurquoise2，其第一片段为SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列，第二片段为SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的重组载体组合，其中，所述第一荧光蛋白的第一片段和第二片段的编码基因分别插入pcDNA3.1/myc-His-B载体，优选地，所述第一荧光蛋白的第一片段和第二片段的编码基因分别插入pcDNA3.1/myc-His-B载体的KpnI位点或XbaI位点。

7.根据权利要求1所述的重组载体组合，其中，所述第二荧光蛋白为EYFP，其第一片段为SEQ ID NO：13所示的氨基酸序列，第二片段为SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列。

8.根据权利要求7所述的重组载体组合，其中，所述第二荧光蛋白的第一片段和第二片段的编码基因分别插入pcDNA3.1/myc-His-B载体，优选地，所述第二荧光蛋白的第一片段和第二片段的编码基因分别插入pcDNA3.1/myc-His-B载体的Kpn I位点或Xba I位点。

9.利用权利要求1-8任一项所述重组载体组合实时检测四种待测蛋白相互作用的方法，包括：

将四种待测蛋白的编码基因分别插入第一重组载体、第二重组载体、第三重组载体和第四重组载体得到分别表达四种融合蛋白的重组载体；

将表达四种融合蛋白的重组载体转入到同一宿主细胞中；

检测所述宿主细胞的荧光信号，并判断四种待测蛋白之间是否相互作用。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，如果所述宿主细胞中产生FRET信号，则四种待测蛋白之间有相互作用并且相互作用的空间距离小于10纳米；

如果所述宿主细胞中未产生FRET信号，则四种待测蛋白之间无相互作用或者空间距离大于10纳米。