[发明专利]一种高谷氨酸驴胶原活性肽的应用

权利要求书

1.一种驴胶原蛋白肽，其特征在于，在所述驴胶原蛋白肽中，相对于甘氨酸，谷氨酸的含量为50～75％，相对分子质量为180～2000Da的肽占总驴胶原蛋白肽含量的70％以上，肽含量为95～99％；所述驴胶原蛋白肽的制备方法为：

(1)酶解消化：选用驴源性胶原蛋白，采用复合酶解技术进行体外消化，灭酶，离心后取上清液即为胶原多肽酶解液；当所述复合酶为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，先向酶解体系中加入终浓度为1000～5000U/mL的木瓜蛋白酶，保持pH为7.0～9.0、温度40～60℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为500～3000U/mL的碱性蛋白酶，保持pH为9.0～12.0、温度40～60℃，酶解2～4h；

当所述复合酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，向酶解体系中加入终浓度为1000～3000U/mL的胃蛋白酶，保持pH为2.5～3.5、温度30～40℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为300～600U/mL的胰蛋白酶，保持pH为6.0～8.0、温度30～40℃，酶解2～4h；

当所述酶为中性蛋白酶和碱性蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，向酶解体系中加入终浓度为1000～3000U/mL的中性蛋白酶，保持pH为6.0～8.0、温度40～50℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为2000～4000U/mL的碱性蛋白酶，保持pH为8.0～10.0、温度40～50℃，酶解2～4h；

(2)分离制备：将胶原多肽酶解液经过利用固定化金属亲和层析经洗脱液洗脱，分离出不同吸附强度的组分，收集吸附力强的肽组分，纳滤浓缩脱盐、冷冻干燥得到高谷氨酸驴胶原蛋白肽；所述固定化金属亲和层析中，使用40％～80％的二甲基亚砜为洗涤剂，环氧氯丙烷为活化剂，亚氨基二乙酸为接枝配基；所述洗脱液洗脱的步骤为：先用缓冲液A：0.05-0.1mol/L乙酸钠，0.05-0.1mol/L NaCl洗脱至基线平稳，然后用缓冲液B：0.02-0.1mol/L磷酸氢二钠、0.05-0.1mol/LNaCl洗脱强亲和能力的部分，即为吸附力强的肽组分。

2.如权利要求1所述的驴胶原蛋白肽，其特征在于，步骤(2)的固定化金属亲和层析中，使用40％～80％的二甲基亚砜为洗涤剂，环氧氯丙烷为活化剂，活化温度为30～60℃，活化时间2～4h；亚氨基二乙酸为接枝配基，接枝温度50～70℃，时间8～16h。