[发明专利]一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法

说明书

本发明涉及冻存液配制技术领域，具体涉及一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法。一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法，至少包括以下步骤：向二甲基亚砜中加入葡萄糖注射液、氯化钠注射液、右旋糖苷、复方电解质注射液，混合均匀；然后加入人血白蛋白，混合均匀，得冻存液。本发明通过对人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法的优化，使制备得到的冻存液具有较高的稳定性，在制备过程中和完成后，均无絮状物或沉淀产生，维持人脐带间充质干细胞功能性指标和生物学功能，提高人脐带间充质干细胞回输对人体的安全性和生物相容性。

技术领域

本发明涉及冻存液配制技术领域，具体涉及一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法。

背景技术

人脐带间充质干细胞是指从脐带中分离的一种多能干细胞，与其他来源的间充质干细胞比较有明显的临床应用优势，如取材容易、易收集、冷冻保存及相对纯净等，具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化，如成骨细胞、软骨细胞、类肝细胞、类胰岛素细胞、神经细胞和心肌细胞等，且无伦理方面的问题。目前，人脐带间充质干细胞已经在临床领域得到应用并取得令人鼓舞的治疗效果。

人脐带间充质干细胞的种子库在临床上已经广泛应用，但也存在受冻存条件限制而不能大规模应用的问题，干细胞的冻存过程中无外源性污染是人脐带间充质干细胞在临床治疗应用中安全可靠的关键，一方面由于常规冻存液中的胎牛血清含有各种不明确的细胞生长因子，会对细胞的分化形成干扰，另一方面采用动物血清培养的干细胞进行临床应用，可能引起病原体的交叉感染，因此需要开发成分明确的人脐带间充质干细胞无血清冻存液。

人脐带间充质干细胞种子库细胞的长期活性与冻存坏境有密切关系，冻存液的微环境对人脐带间充质干细胞有着重要影响，现有的冻存液对细胞存在较大的毒害作用，同时稳定性欠佳。因此，急需一种能够防止冻存过程中的细胞损伤、保持细胞复苏后的高活率的具有高稳定性的冻存液的制备方法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明第一个方面提供了一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法，至少包括以下步骤：向二甲基亚砜中加入葡萄糖注射液、氯化钠注射液、右旋糖苷、复方电解质注射液，混合均匀；然后加入人血白蛋白，混合均匀，得冻存液。

作为本发明一种优选的技术方案，所述葡萄糖注射液、氯化钠注射液、右旋糖苷、复方电解质注射液和人血白蛋白用于冻存液制备前，还包括预冷处理。

作为本发明一种优选的技术方案，所述冻存液制备完成后，还包括预冷处理。

作为本发明一种优选的技术方案，所述预冷处理为：在1-10℃的条件下保存至少30min。

本发明第二个方面提供了一种人脐带间充质干细胞注射液冻存液，根据所述的人脐带间充质干细胞注射液冻存液的制备方法制得，所述冻存液的制备原料，按体积百分比计，包括以下组分：二甲基亚砜5％、人血白蛋白20-50％、复方电解质注射液40-60％、氯化钠注射液1-10％、葡萄糖注射液1-10％、右旋糖苷5-15％。

作为本发明一种优选的技术方案，所述右旋糖苷为右旋糖酐-40和/或右旋糖酐-70。

作为本发明一种优选的技术方案，所述二甲基亚砜和人血白蛋白的体积比为1：(3-8)。

作为本发明一种优选的技术方案，所述二甲基亚砜和右旋糖苷的体积比为1：(1-2)。

作为本发明一种优选的技术方案，所述葡萄糖注射液的质量浓度为10％；所述氯化钠注射液的质量浓度为0.9％。

作为本发明一种优选的技术方案，所述葡萄糖注射液和右旋糖苷的体积比为1：(1-10)。

有益效果