[发明专利]基因敲除及试剂盒在审
| 申请号： | 202110111949.9 | 申请日： | 2018-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN112779288A | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 黄行许;王新;贾堃 | 申请（专利权）人： | 肇庆华夏凯奇生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京迎硕知识产权代理事务所(普通合伙) 11512 | 代理人： | 张群峰;钱扬保 |
| 地址： | 526238 广东省肇庆市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因 试剂盒 | ||
【权利要求书】：
1.一种小鼠Tyr基因敲除方法，包括：
选定待敲除基因的编码区的至少两个19～21bp-NGG目标序列，使其分别包含完整的目标密码子CAA、CAG或CGA，其中的目标单碱基C位于目标序列的第4-8位，目标密码子与NGG间隔12-14bp；
利用至少两个sgRNA序列来将BE3定位到相应的目标序列以使目标密码子中的目标单碱基C变成T从而相应引入终止密码子TAA或TAG、TGA以实现基因敲除；
所述至少两个sgRNA序列为分别与所述至少两个目标序列互补对应的19～21bp序列，
其中所述至少两个sgRNA被共注射以实现同一基因的有效敲除。
2.根据权利要求1所述的方法，其中BE3为rAPOBEC-SpCas9-NLS-UGI-NLS。
3.权利要求1所述方法在细胞系N2a进行鼠Tyr基因敲除的应用。
4.根据权利要求1所述方法在小鼠胚胎细胞进行鼠Tyr基因敲除的应用。
5.一种用于基因敲除的试剂盒，包括权利要求1中所述的sgRNA、BE3以及扩增试剂。
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