[发明专利]一种子痫前期小鼠动物模型的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种子痫前期小鼠动物模型的构建方法及其应用。所述构建方法为降低小鼠中m6A修饰水平，获得RNA m6A修饰水平降低的突变体小鼠即为子痫前期小鼠动物模型；本发明具体通过ES打靶技术构建了Mettl3^+/‑杂合突变小鼠，结果表明，所述突变体小鼠对PE诱导剂L‑NAME敏感性增加，呈现PE的特点，为子痫前期病因诊断、预防和治疗提供了新的思路和新手段。

技术领域

本发明涉及疾病动物模型构建技术领域，更具体地，涉及一种子痫前期小鼠动物模型的构建方法及其应用。

背景技术

子痫前期(preeclampsia，PE)孕妇妊娠20周以后新发高血压并伴蛋白尿或水肿、头晕等，病情严重时可伴随有全身多脏器病变。子痫前期在全球范围内的发病率为5％～10％，在围产保健不完善的地区其发生率可高达15％～20％，是导致孕产妇死亡、早产及新生儿死亡的重要原因之一。子痫前期的发病机制尚不明确，但目前研究认为其发生与早期滋养细胞侵袭障碍及螺旋动脉重铸障碍密切相关。

由于医学伦理学的限制，动物模型成为研究子痫前期发生发展及探索预防治疗措施的重要工具。非人灵长类动物在妊娠建立和维持方面与人类有更多的相似性，作为人类妊娠疾病研究的动物模型具有无可比拟的优势，但由于其价格昂贵、操作复杂、实验周期长，尚不能作为常规动物模型使用。目前，小鼠和大鼠仍是构建人类子痫前期动物模型的首选实验动物。

目前已有PE模型制备方法主要包括：手术制作PE动物模型、诱导性PE动物模型、基因改变PE动物模型。手术制作PE模型是采用手术钳夹腹主动脉或子宫动脉，减少子宫血流灌注，造成子官胎盘缺血缺氧，多用于大鼠，手术制作PE动物模型，手术要求高，对动物创伤大，易感染，造模成功率不稳定。而诱导性PE动物模型则是采用不同的药物诱导方法，使模型动物产生PE样症状；例如中国专利CN106310238A公开了一种通过尾静脉注射Ad-sAxl至孕母鼠体内构建子痫前期的大鼠模型诱导性性PE模型，原理均为诱导母体产生相似病理状态，以及模拟疾病情况下相同的病理环境，但仍不能全面地体现PE多病因、多发病过程的特点，对于PE发病机制的研究并不适合。基因改变PE动物模型，即PE基因缺陷模型多采用基因打把技术敲除单个基因，观察改基因缺陷动物孕期是否会出现PE样症状。基因改变PE模型，单个基因的改变对下游通路的影响较为固定和局限，并不能再现PE的所有特征。因此，建立一种普遍且具有发展进程的PE动物模型是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种子痫前期小鼠动物模型的构建方法，其中所述动物模型是利用Mettl3基因突变致RNA m6A修饰降低所诱导的动物模型。

本发明还提供利用上述方法构建得到的子痫前期小鼠动物模型的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

m6A(N6-methyladenosine)是mRNA和lncRNA上丰度最高的修饰，从酵母到人类的多个物种中高度保守。转录过程中，METTL3-METTL14复合物催化前体RNA上m6A的发生；同时，m6A可以被FTO和ALKBH5调控去甲基化，并能被YTH家族的蛋白所识别。m6A参与了众多发育过程，在性别决定、调节母源mRNA清除、小鼠精子发生等过程中起重要作用。m6A失调会引起包括癌症在内的多种疾病，m6A缺失会导致小鼠小脑发育缺陷、小鼠胚胎致死。而本发明研究发现，m6A修饰水平降低的突变体小鼠具有PE的表型，表明RNA m6A修饰水平与PE发生相关，RNA m6A可以作为靶点用于子痫前期诊断、治疗或预防子痫前期；或用于制备防治子痫前期致病的药物；或用于构建子痫前期动物模型。

因此，本发明首先保护RNA m6A作为靶点在子痫前期中的应用，所述应用选自：用于子痫前期诊断、治疗或预防子痫前期；或用于制备防治子痫前期致病的药物；或用于构建子痫前期动物模型。