[发明专利]柔红霉素的进罐种子的培养方法

说明书

本发明公开了一种柔红霉素的进罐种子的培养方法，其中，其步骤如下：S1：菌种活化：将菌种在培养基中于25‑29℃下活化培养10‑14天，待长出单菌落后，转接至固体斜面培养基上，培养得到菌体，待用；S2：摇瓶发酵培养：将活化后的菌株制成菌悬液，而后按1‑5％体积的接种量将柔红霉素菌悬液接种到摇瓶发酵培养基中，以170‑190转/分钟的转速，25‑30℃振荡培养40‑52小时，即得摇瓶发酵培养液；S3：种子罐培养：S4：发酵罐培养；本发明采用该培养基及其发酵方法，能够降低能耗和发酵成本，为提高产品的市场竞争力，提高有效保障；通过调整不同的发酵环境，保证其供应充足，从而实现柔红霉素稳定、高效地生产。

技术领域

本发明属于发酵工程领域，特别是柔红霉素的进罐种子的培养方法。

背景技术

柔红霉素是一种强效蒽环类抗肿瘤抗生素，主要用于治疗对常用抗肿瘤 药物产生耐药性的急性粒细胞白血病或急性淋巴细胞白血病，对淋巴肉瘤、 神经母细胞瘤、骨骼肌瘤、绒癌也有一定疗效。柔红霉素的作用机理与阿霉 素类似，能直接与DNA结合，抑制DNA复制与RNA合成，对RNA的影响尤为 显著，能选择性地作用于嘌呤核苷。

在生产柔红霉素发酵的过程中，因发酵周期较长，导致能耗较高，柔红 霉素的发酵成本高，缺乏市场竞争力。现有需要调整周期长，在短时间内以 达到很好的想效果，缩小生产成本。

发明内容

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种柔红霉素的进罐种子 的培养方法，其中，其步骤如下：

S1：菌种活化：将菌种在培养基中于25-29℃下活化培养10-14天，待长 出单菌落后，转接至固体斜面培养基上，培养得到菌体，待用；

S2：摇瓶发酵培养：将活化后的菌株制成菌悬液，而后按1-5％体积的接 种量将柔红霉素菌悬液接种到摇瓶发酵培养基中，以170-190转/分钟的转速， 25-30℃振荡培养40-52小时，即得摇瓶发酵培养液；

S3：种子罐培养：将摇瓶发酵培养液按1％-10％体积接种量接入种子罐中， 温度：27-29℃、通风比为：0.05-0.22V/V·m、搅拌速率：160-200rpm、罐 压：0.05-0.12Mpa、发酵培养24小时，得种子培养液；柔红霉素发酵种子罐 培养过程按照培养时间分为3个阶段：培养0-12h阶段；培养12-16h阶段； 培养16-24h阶段；

其中培养0-12h阶段，控制培养温度：27℃；罐压：0.05-0.10MPa；通 风比V/V·min：0.05-0.08；搅拌速率：160-180rpm；

培养12-16h阶段，控制培养温度：调节降温系统，通过菌种生长产生的 热量将罐温升温至28℃；罐压：0.08-0.10MPa；通风比V/V·min：0.12-0.14， 搅拌速率：180-200rpm；

培养16-24h阶段，控制培养温度：29℃；罐压：0.10-0.12MPa；通风比 V/V·min：0.20-0.22；搅拌速率：180-200rpm；

S4：发酵罐培养：按3-3.5％体积的接种量将种子培养液接入发酵罐中， 通入无菌空气在26-29℃、搅拌速率180-200rpm、罐压0.05-0.12Mpa、发酵 培养120-180小时，得到柔红霉素发酵液。

优选的，在步骤S3中12-16h阶段流加葡萄糖，控制葡萄糖浓度大于 0.3％。

优选的，所述步骤S1中的培养基中含有马铃薯、葡萄糖、琼脂。

优选的，所述步骤S3中种子罐在128℃下蒸汽空消灭菌30分钟，装入种 子培养基后再120℃蒸汽灭菌30分钟，保压降温25-30℃，而后接种摇瓶发 酵培养液，种子培养基装量为罐体积的60-70％。

有益效果：