[发明专利]含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶及其制备方法和应用

说明书

本发明属于干细胞技术领域，特别涉及含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶及其制备方法和应用。本发明将脐带间充质干细胞和纳米技术进行结合，并且对脐带间充质干细胞培养液中的细胞因子进行有效的利用，经过纳米技术处理的透明质酸纳米凝胶能够有效地促进营养成分透过皮层，增强皮肤对营养物质的吸收。本发明制备方法工艺简单，反应条件温和，易于操作，成本较低。本发明提供的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶有预防和修复皮肤损伤，延缓衰老等功效，注入皮肤真皮层可以促进皮肤细胞新陈代谢，修复和替换老化细胞，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，特别涉及含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

间充质干细胞(MSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，可以从骨髓、外周血、脂肪、脐带等多种组织中获得，间充质干细胞不仅可以分泌大量的生物活性因子，而且细胞内也含有丰富的生物活性物质，可以有效调控机体信号传导、活化人体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、衰老细胞等，目前间充质干细胞在细胞移植、基因治疗、美容护肤等方面越来越受到人们的关注。研究发现干细胞生长因子如成纤维细胞生长因子(FGF)，角质细胞生长因子(KGF)，表皮生长因子(EGF)，血管内皮细胞生长因子(VEGF)等能诱导皮肤细胞包括成纤维细胞与角质细胞的增殖及皮肤附属器官的再生，具有良好的美容修复能力。但作为蛋白大分子，这些细胞因子透皮性能很差，常规涂抹无法达到有效透皮剂量，难以取得理想的皮损修复效果，且细胞因子体外稳定性差、保存条件苛刻，常温易失活，因此其临床应用受到了极大的限制。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供了含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，目的是为了解决现有技术中，干细胞的营养因子皮性能很差，常规涂抹无法达到有效透皮剂量，难以取得理想的皮损修复效果，且细胞因子体外稳定性差、保存条件苛刻，常温易失活，因此其临床应用受到了极大的限制的技术问题。

本发明提供的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，具体技术方案如下：

脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，包括如下步骤：

S1，脐带间充质干细胞的原代分离和培养；

S2，将脐带间充质干细胞培养混合液中的细胞与上清液进行分离，获取培养液和脐带间充质干细胞；

S3，将步骤S2中的培养液与透明质酸钠进行混合，采用高压均质法制备透明质酸钠纳米水凝胶；

S4，将纳米水凝胶与步骤S2中分离的脐带间充质干细胞进行孵育，加入胰酶消化，离心，用PBS重悬，获得含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶。

在某些实施方式中，步骤S1中，脐带间充质干细胞的原代分离和培养的具体步骤如下：

S11，获取去掉血管组织的脐带组织，将脐带组织剪碎，加入含FBS和双抗的培养基中培养，得到原代人脐带间充质干细胞；

S12，当细胞融合度为80％-90％时，胰蛋白酶消化细胞传代培养，取传代细胞，继续培养；

S13，当细胞融合度80％-90％时，弃含FBS的培养上清液，PBS洗涤细胞，加入无血清培养基继续培养。

在某些实施方式中，步骤S2中，将第5-10代的脐带间充质干细胞培养混合液中的细胞与上清液进行分离，所述上清液经过浓缩、过滤获得培养液。

在某些实施方式中，步骤S3包括如下步骤：

S31，将透明质酸钠和聚乙二醇-400溶解于步骤S2中的培养液中，形成水相；

S32，将步骤S31中的水相加入有机相中，经过高压均质处理得到初乳；