[发明专利]含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶及其制备方法和应用

权利要求书

1.含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1，脐带间充质干细胞的原代分离和培养；

S2，将脐带间充质干细胞培养混合液中的细胞与上清液进行分离，获取培养液和脐带间充质干细胞；

S3，将步骤S2中的培养液与透明质酸钠进行混合，采用高压均质法制备透明质酸钠纳米水凝胶；

S4，将纳米水凝胶与步骤S2中分离的脐带间充质干细胞进行孵育，加入胰酶消化，离心，用PBS重悬，获得含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶。

2.根据权利要求1所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S1中，脐带间充质干细胞的原代分离和培养的具体步骤如下：

S11，获取去掉血管组织的脐带组织，将脐带组织剪碎，加入含FBS和双抗的培养基中培养，得到原代人脐带间充质干细胞；

S12，当细胞融合度为80％-90％时，胰蛋白酶消化细胞传代培养，取传代细胞，继续培养；

S13，当细胞融合度80％-90％时，弃含FBS的培养上清液，PBS洗涤细胞，加入无血清培养基继续培养。

3.根据权利要求2所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S2中，将第5-10代的脐带间充质干细胞培养混合液中的细胞与上清液进行分离，所述上清液经过浓缩、过滤获得培养液。

4.根据权利要求1所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S3包括如下步骤：

S31，将透明质酸钠和聚乙二醇-400溶解于步骤S2中的培养液中，形成水相；

S32，将步骤S31中的水相加入有机相中，经过高压均质处理得到初乳；

S33，步骤S32中的初乳经过减压蒸发除去有机溶剂后加入水性介质，再经过高压均质处理，获得纳米水凝胶。

5.根据权利要求4所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S31中，所述透明质酸钠的浓度为0.2-0.4％，所述聚乙二醇-400的浓度为0.1％-10％；

步骤S32中，所述水相与所述有机相的体积比为1:1-1:8，所述有机相为二氯甲烷、丙酮、环己烷中的一种或多种；

步骤S33中，所述高压均质处理的工艺参数如下：压力为800-1200bar，循环3-10次。

6.根据权利要求1所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述孵育时间为3-5h，所述纳米水凝胶的浓度为0.05-0.2mM。

7.含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶，其特征在于，根据权利要求1-6任一项所述的方法制备的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶。

8.含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶的应用，基于权利要求7所述的含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶，其特征在于，将所述含脐带间充质干细胞的纳米复合水凝胶附在微针上，用于肌肤的皮下注射。