[发明专利]一种凝结芽孢杆菌快速产孢的方法

说明书

本发明公开了一种凝结芽孢杆菌快速产孢的方法，属于生物技术领域。本发明方法为：将凝结芽孢杆菌在80‑100℃进行热处理后涂布平板进行培养，挑取形成芽孢的单菌落重复进行热处理和涂布平板培养，形成芽孢的单菌落为快速产孢的凝结芽孢杆菌，其可用于扩大培养。通过对菌株进行循环热处理，可以维持菌株的产孢活性。通过本发明能够使凝结芽孢杆菌15‑24h就可以形成芽孢，比一般的芽孢形成时间提前了12‑48h，且芽孢率可达到90%以上。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种凝结芽孢杆菌快速产孢的方法。

背景技术

凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）是一类能形成芽孢的产乳酸细菌，革兰氏阳性，属于厚壁菌门，芽孢杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属，1989年美国食品与药物管理局（FDA）列入可用于饲料的安全菌株，及1992年再次批准42种包括的5种芽孢杆菌中，凝结芽孢杆菌排在第一位。凝结芽孢杆菌在人体肠道内能促进微生物菌群平衡，提高机体免疫力，还能产生大量抑制有害菌生长的凝固素和乳酸等抑菌物质，在食品和药品方面的应用越来越广泛。

因为芽孢具有抗干燥、耐高温、耐酸碱能力强等特点，市售的产品多以芽孢的形式保存。而现有的技术凝结芽孢杆菌产孢能力较差、周期长、芽孢率低，基于此研究一种产孢快、产孢周期短的方法非常重要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种凝结芽孢杆菌快速产孢的方法，通过该方法能够时凝结芽孢杆菌的产孢周期短、芽孢生成比率高。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种凝结芽孢杆菌快速产孢的方法，包括如下步骤：将凝结芽孢杆菌在80-100℃进行热处理后涂布平板进行培养，挑取形成芽孢的单菌落重复进行热处理和涂布平板培养，形成芽孢的单菌落为快速产孢的凝结芽孢杆菌，其可用于扩大培养。通过此方法对菌株进行循环热处理，可以维持凝结芽孢杆菌的产孢活性。

优选的，所述的热处理为将凝结芽孢杆菌制成菌悬液进行热处理；热处理为在热水中进行；热处理的时间为15-30min。

优选的，所述的凝结芽孢杆菌快速产孢的方法，包括如下步骤：

（1）将凝结芽孢杆菌制成菌悬液进行梯度稀释，选择合适稀释梯度的菌悬液涂布平板，培养48-72h。

（2）挑取形成芽孢的单菌落制成菌悬液，在80-100℃热水中进行热处理15-30min。

（3）将热处理后的菌悬液进行梯度稀释，选择合适稀释梯度的菌悬液涂布平板，培养24-72h。

（4）挑取形成芽孢的单菌落制成菌悬液，在80-100℃热水中进行二次热处理15-30min。

（5）取热处理后的菌悬液进行梯度稀释，选择合适稀释梯度的菌悬液涂布平板，培养15-72h，形成芽孢的单菌落为快速产孢的凝结芽孢杆菌，其可用于扩大培养。

优选的，上述步骤中使用灭菌生理盐水制备菌悬液和梯度稀释。进一步地，使用1mL灭菌生理盐水将单菌落制成菌悬液；选择合适稀释梯度的菌悬液0.5mL涂布平板。

优选的，上述步骤中热处理的条件优选为在90℃热水中处理15min。

优选的，上述步骤中培养的温度优选为42℃。

本发明相对于现有技术具有如下优点及效果：通过本发明筛选出来的凝结芽孢杆菌15-24h就可以形成芽孢，比一般的芽孢形成时间提前了12-48h，且芽孢率可达到90%以上。

附图说明

图1是培养72h菌体热处理前制成菌悬液的镜检图，看不到菌体形成芽孢。