[发明专利]抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG及其制备方法和应用，LL37的17‑29氨基酸残基FD是其活性中心。抗菌肽LG序列如序列表SEQ ID No.1所示。以解决FD抗菌活性不高，并且存在盐离子的环境下导致抗菌活性有较大降低的问题。制备方法是：将FD的衍生肽FR，通过直接连接、刚性连接肽AEAAAKA连接和柔性连接肽GGGGS连接的设计，获得三种二倍体并以“选择指数”作为评价指标进行筛选，本发明得到的抗菌肽LG与原活性中心片段FD相比，抗菌活性提升了近20倍；抗菌肽LG与衍生肽FR相比，抑菌活性提升了约3倍，具有更好的盐离子稳定性，具有开发成新型抗菌药物的潜力。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，动物产品中抗生素的严重残留已给人类健康带来不利影响。欧盟自2006年率先禁止饲料中添加抗生素以来，许多国家都已出台了相关政策，这也标志着抗生素黄金时代的终结。

抗菌肽(Antimicrobial peptides，AMPs)作为一种新型饲料添加剂，其开发前景优良，不具有传统抗生素在畜牧业中的应用所产生的负面影响，且抗菌肽具有分子量小、热稳定性高、广谱抗菌、作用机制独特等特点。LL37是人类cathelicidin家族的唯一成员，由白血球(主要是嗜中性粒细胞)和各种上皮细胞产生并广泛存在于各种人体组织和体液中。由于其具有参与免疫调节，引起免疫细胞趋化和促进伤口愈合的突出优势，近年来学者们对LL37保持着较高的研究兴趣。此外，它还对多种类型的病原体具有防御作用，包括细菌，真菌，病毒，寄生虫乃至癌细胞。系列研究表明，LL37的17-29氨基酸残基(FD)是其活性中心。然而FD对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌活性不高，并且存在盐离子的环境下导致抗菌活性有较大降低的问题。其衍生肽FR分子量小(3.82KDa)，极易被微生物蛋白酶降解。

发明内容

基于以上不足之处，本发明的目的在于提供一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG，以解决FD抗菌活性不高，并且存在盐离子的环境下导致抗菌活性有较大降低的问题，从而提高了抗菌活性及盐离子的稳定性。

本发明通过如下技术实现：一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG，其序列如序列表SEQ ID No.1所示。

本发明的另一目的在于公开如上所述的一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG的制备方法，步骤如下：

(1)选取抗菌肽LL37的活性中心FD，将抗菌肽FD中的天冬氨酸D替换为精氨酸R，从而获得衍生肽FR；

(2)通过直接连接、刚性连接肽AEAAAKA连接和柔性连接肽GGGGS连接的设计，获得三种二倍体(FR)₂、LG和LA，并以“选择指数”作为评价指标进行筛选；

(3)将“选择指数”最高的二倍体LG通过多肽合成仪，采用固相化学合成法进行合成，即完成抗菌肽LG的制备。

本发明的另一目的在于公开一种抗菌肽LL37活性中心衍生肽二倍体抗菌肽LG在制备治疗革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌引发的感染性疾病药物中的应用。

本发明的有益效果及优点：本发明的二倍体抗菌肽LG与原活性中心片段FD相比，抗菌活性提升了近20倍；抗菌肽LG与衍生肽FR相比，抑菌活性提升了约3倍，具有更好的盐离子稳定性，具有开发成新型抗菌药物的潜力。

附图说明

图1是(FR)₂、LG、LA的溶血活性图。

图2是6×His-SUMO-LG重组表达载体构建图。

图3为毕赤酵母阳性转化子PCR验证情况图，