[发明专利]一种高效清除细菌生物被膜的方法

说明书

本发明公开了一种高效清除细菌生物被膜的方法，属于微生物领域。该方法采用二槽隔膜电解水装置制得酸性电解水，用其迅速处理生物被膜不低于5min，再用含0.5g/100mL NaS₂O₃的PBS缓冲液中和不低于5min，其中生物被膜为预形成、包含有被膜菌且经无菌磷酸缓冲溶液PBS洗涤去除未附着菌的生物被膜。本发明利用酸性电解水具有低pH值、高氧化还原电位和一定的有效氯等特性以达到破坏生物被膜和清除被膜菌的双重功效，高效且安全。

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及一种高效清除细菌生物被膜的方法。

背景技术

食源性病原菌是引起食源性疾病的首要原因。在食品加工环境中，引起食品污染机会较多的大肠杆菌、单增李斯特菌和副溶血性弧菌等常见的食源性致病菌，它们在一定的条件下黏附在食品、加工接触面及非食品加工接触面(如墙壁、下水道、死角等地方)后形成生物被膜。生物被膜是指细菌附着于接触物体表面分泌多糖、蛋白质等多聚物，并将自身包裹其中的膜状物，绝大多数的细菌都是以生物被膜的形式附着在自然环境中有生命和无生命的物体表面的方式而存在，这种生活方式可以帮助其抵抗环境中各种不利因素如过酸或过碱的环境。但是，被膜菌对消毒剂的抵抗力是浮游细菌的数百倍甚至上千倍，由于其难以去除的特性，即使在食品加工中经过严格的清洗消毒工序，生物被膜还有可能逗留在食品接触表面并危害食品安全。据估计，约65％人类细菌性感染是由生物被膜引起的，在食品工业中形成的生物被膜是引起食源性疾病的罪魁祸首。

胞外多糖在形成生物被膜与抵抗外界压力中起重要作用，其可以阻止抗生素、消毒剂等接触包裹于被膜内的细菌从而起到屏蔽作用，消弱它们对被膜菌的杀伤效应，不仅使得细菌生物被膜对外界压力的抗性增加，并且能够保护生物被膜结构的完整性。因此控制食品中各种致病菌的污染，特别是通过破坏胞外多糖来防止其形成生物被膜交叉污染食品，是控制食源性疾病发生的重要内容。常见的控制生物被膜方法有高压喷射处理、亚硝酸、过氧化氢和次氯酸等，这些方法对生物被膜有一定的破坏作用，二氧化氯和柠檬酸/亚甲基蓝/对羟基苯甲酸能有效杀灭包括被膜菌，但这些方法不同时具备破坏生物被膜胞外多糖和清除被膜菌的双重作用。酸性电解水被视为一种环境友好型的杀菌剂，具有低pH值、高氧化还原电位和一定的有效氯等特点，其主要通过干扰膜的平衡使微生物的细胞膜电位发生改变，导致细胞通透性增强、细菌肿胀及细胞代谢酶的破坏，胞内物质溢出、溶解，从而达到杀灭微生物的作用。酸性电解水已广泛应用于医疗、食品加工、环境卫生等行业的杀菌消毒，具有杀菌力强、谱广、迅速等特点，但酸性电解水对食源性致病菌生物被膜的清除作用少见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效清除细菌生物被膜的方法，同时具备破坏细菌尤其是食源性致病菌生物被膜胞外多糖和清除被膜菌的双重作用。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：

一种高效清除细菌生物被膜的方法，先用酸性电解水处理生物被膜不低于5min，再用含0.5g/100mL NaS₂O₃的PBS缓冲液中和不低于5min；所述生物被膜为预形成、包含有被膜菌且经无菌磷酸缓冲溶液PBS洗涤已去除未附着菌的生物被膜。

优选地，所述酸性电解水由二槽隔膜电解水装置制得。

优选地，所述细菌选自大肠杆菌、副溶血性弧菌或单增李斯特菌。

更优选地，所述细菌选自大肠杆菌ATCC 25404、副溶血性弧菌S36或单增李斯特菌WaX12。

优选地，所述酸性电解水迅速处理生物被膜5min。

优选地，所述PBS缓冲液中和5min。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：酸性电解水具有低pH值、高氧化还原电位和一定的有效氯等特性，是一种环保、廉价、易获取的生化制剂，通过其清除细菌生物被膜，具有在短时间内破坏生物被膜和清除被膜菌的双重功效。