[发明专利]一种比色/荧光探针、检测玉米赤霉烯酮的试纸条及应用有效
申请号: | 202110053797.1 | 申请日: | 2021-01-15 |
公开(公告)号: | CN112903995B | 公开(公告)日: | 2023-04-25 |
发明(设计)人: | 王丽;赵爽;补彤;白菲儿;何坤益;徐智豪 | 申请(专利权)人: | 西北农林科技大学 |
主分类号: | G01N33/558 | 分类号: | G01N33/558;G01N33/577;G01N33/52;G01N21/64;G01N21/31 |
代理公司: | 西安恒泰知识产权代理事务所 61216 | 代理人: | 孙雅静 |
地址: | 712100 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 比色 荧光 探针 检测 玉米 赤霉烯酮 试纸 应用 | ||
1.一种比色/荧光探针,其特征在于,含有:
玉米赤霉烯酮单克隆抗体和信号载体,玉米赤霉烯酮单克隆抗体吸附于所述的信号载体上;所述的信号载体为刚果红染色的金黄色葡萄球菌或异硫氰酸荧光素染色的金黄色葡萄球菌;
所述的金黄色葡萄球菌的粒径为598~609 nm,金黄色葡萄球菌的OD600值为2.6;
玉米赤霉烯酮单克隆抗体的浓度为1mg/mL;
所述的刚果红染色的金黄色葡萄球菌为采用溶液浓度为1 mg/mL的刚果红染色,异硫氰酸荧光素染色的金黄色葡萄球菌为采用溶液浓度为1 mg/mL的异硫氰酸荧光素染色。
2.如权利要求1所述的比色/荧光探针,其特征在于,比色/荧光探针的制备方法包括:
玉米赤霉烯酮单克隆抗体与刚果红染色后的金黄色葡萄球菌液混合或异硫氰酸荧光素染色后的金黄色葡萄球菌液混合,再经过蛋白封闭及离心重悬于缓冲液即得。
3.如权利要求2所述的比色/荧光探针,其特征在于,玉米赤霉烯酮单克隆抗体与刚果红染色后的金黄色葡萄球菌液的用量比为4 μg :1 mL;
玉米赤霉烯酮单克隆抗体与异硫氰酸荧光素染色后的金黄色葡萄球菌液的用量比为4μg :1 mL;
混合时间为2 h,蛋白封闭的时间为30 min。
4.如权利要求1或2所述的比色/荧光探针,其特征在于,刚果红对金黄色葡萄球菌的染色时间为25min,异硫氰酸荧光素对金黄色葡萄球菌的染色时间为60min。
5.权利要求1~4任一所述的比色/荧光探针用于制备检测粮食中玉米赤霉烯酮试纸条或试剂盒的应用。
6.一种检测玉米赤霉烯酮的试纸条,其特征在于,该试纸条上载有权利要求1~4任一权利要求所述的比色/荧光探针。
7.如权利要求6所述的检测玉米赤霉烯酮的试纸条,其特征在于,所述的试纸条包括衬板,衬板上贴有硝酸纤维素膜,硝酸纤维素膜的一端覆盖吸水垫,硝酸纤维素膜的另一端依次覆盖样品垫和结合垫,硝酸纤维素膜的非覆盖面上沿横向设置检测线和控制线,结合垫及样品垫分别经封闭液封闭处理。
8.如权利要求7所述的检测玉米赤霉烯酮的试纸条,其特征在于,1 mg/mL玉米赤霉烯酮-牛血清白蛋白偶联物以1 μL/cm的划线速率涂覆在检测线上得检测线,0.5 mg/mL羊抗鼠免疫球蛋白以1 μL/cm的划线速率涂覆在控制线上为控制线;37℃条件下干燥30min;
所述的样品垫与结合垫的制备方法包括:将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿,37℃干燥8h;
所述的样品垫的规格为长13~18 mm,宽2~4 mm,所述的结合垫的规格为长7~9 mm,宽2~4 mm。
9.权利要求6~8任一所述的检测玉米赤霉烯酮的试纸条用于检测玉米、绿豆、小米和/或花生中玉米赤霉烯酮的应用。
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