[发明专利]一种具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性的蛋白质及其制备方法

说明书

本发明公开了一种具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性的蛋白质，并公开了其具体的结构。本发明还公开了该蛋白质的应用及制备方法。本发明公开的蛋白质能同时抑制新生血管生长及抑制炎症反应，可通过双重作用机制，对老年性黄斑病变、糖尿病视网膜病变及翼状胬肉等眼科相关疾病具备一定的预防和缓解效果。此外，该蛋白质的提取纯化工艺相对简单，并且重复性强，成本低，利于工业化生产。而且和现有的抗新生血管生长药物康柏西普相比，动物实验结果显示，该蛋白质抑制角膜新生血管生长的效果比康柏西普强。

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别是一种具有抑制新生血管生长及抑制炎 症反应活性的蛋白质及其制备方法。

背景技术

临床上很多眼科疾病都与眼部组织发炎及病理性血管新生相关，包括但 不限于湿性老年性黄斑病变、糖尿病视网膜病变、葡萄膜炎及结膜结缔组织 增生(翼状胬肉)等。眼组织受到外部刺激或损伤后，会产生炎症反应，增 加生长因子的释放修复受损组织。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是人体其中一种重要的生长因子，主要促进血管内皮 细胞增生及形成新生血管。新血管生成是胚胎发育和伤口愈合过程中血管生 长的主要机制。正常血管生成过程不仅包括内皮细胞迁移和增殖，还有血管成熟，血管重塑以及细胞外基质的降解等步骤。在正常条件下，由于血管生 成因子如VEGF和色素上皮衍生因子(PEDF)的表达水平和功能的平衡，内皮 细胞静止而且没有增殖。病理性的新血管生成明显不同于正常的血管，过量 分泌的VEGF会诱导内皮细胞过度生长，快速形成不受控制的病理性新生血管。 这些新生血管结构脆弱，容易出现出血和渗漏。此外，VEGF还会导致微血管 壁内皮细胞形成间隙，增加血管的渗透性。如脉络膜出现病理性的新生血管 增生，有机会侵犯视网膜，渗出的血液可能导致视网膜黄斑病变，病情严重 的患者甚至会失去视力。如新生血管出现在结膜，则可能诱导病理性结膜组 织增生。眼部炎症可能由外部刺激、感染或意外损伤引起，不同部位的炎症 会引起不同的病变，包括角膜炎和葡萄膜炎等。有研究发现，长期的炎症刺 激会增加VEGF的表达，加快病理性的血管新生。现今临床治疗新生血管相关 的眼科疾病主要以针对清除VEGF的单克隆抗体为主。因此，同时具有抗炎生 物活性的抑制新生血管药物能提供更好的疗效。

因鉴于此，特提出此发明。

发明内容

现有针对新生血管的药物治疗以封闭血管渗漏及抑制新生血管生长为 主，临床治疗药物主要有针对VEGF的单克隆抗体，虽然单克隆抗体药物具有 一定疗效，但也具有干扰免疫系统，诱导系统性炎症反应的风险。而且，单 克隆抗体药物的分子量大，结构复杂，不容易存储，更重要的是对生产技术 及生产环境的要求很高，造成单克隆抗体药物的价格相对较高。

对此，本发明提供了一种蛋白质，编号为ZK002，具有抑制新生血管生成 及抗炎生物活性，同时制备工艺简单，成本较低，利于工业化生产。

首先，本发明提供了一种具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应活性的 蛋白质，其编号为ZK002，所述蛋白质采用非还原性SDS-PAGE(非还原性聚 丙烯酰胺凝胶电泳)测定的分子量为25000-35000道尔顿，所述蛋白质的分 子由α链和β链组成，α链的蛋白序列如SEQ ID No.1所示，β链的蛋白序 列如SEQ ID No.2所示；所述蛋白质具有抑制新生血管生长及抑制炎症反应 活性。

该蛋白质采用还原性SDS-PAGE(还原性聚丙烯酰胺凝胶电泳)法测定的 α链分子量为12000-22000道尔顿，β链的分子量为9000-19000道尔顿。晶 体结构观察发现蛋白分子内存在6对链内二硫键(α链和β链各有3对)和1 对链间二硫键。

进一步的，本发明还公开了该蛋白质在抑制新生血管生成和抑制炎症反 应方面的应用，以及在药物组合物中的应用。进一步的，药物组合物中还包 括药学可接受的载体或药学可接受的赋形剂和/或稳定剂。

更进一步的，本发明公开了一种上述蛋白质ZK002的制备方法，依次按 以下步骤进行：