[发明专利]一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法

权利要求书

1.一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述方法包括：

在剖宫产过程中，通过卵巢表面可见的卵泡获得卵泡液；

通过所述卵泡液，获得未成熟的卵丘细胞-卵子-复合体；

将未成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体放置于卵子体外成熟培养液中进行体外成熟培养，获得体外成熟的卵丘细胞-卵子-复合体；

去除体外成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体周边的卵丘细胞和颗粒细胞，获得体外成熟卵母细胞；

将所述体外成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻保存，获得具有发育潜能的卵子，以实现生育力保存。

2.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述剖宫产卵巢表面可见的卵泡的直径为2-10毫米。

3.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述卵子体外成熟培养液为艾尔斯体外成熟培养液RC-1060加入终浓度70-80mIU/毫升的促卵泡生长激素和终浓度70-80mIU/毫升促黄体生成激素混匀获得的混合液。

4.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述卵子体外成熟培养液的体积内圈为1毫升，外圈为2毫升。

5.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，将未成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体放置于卵子体外成熟培养液中进行体外成熟培养，获得体外成熟的卵丘细胞-卵子-复合体，具体包括：

将所述卵子体外成熟培养液分别加入双孔培养皿的内圈和外圈内，于温度为37℃三气培养箱内平衡≥30分钟，获得内圈培养液和外圈培养液；

将未成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体置于所述外圈培养液内清洗，后置于所述内圈培养液中进行体外成熟培养，获得体外成熟的卵丘细胞-卵子-复合体。

6.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，每个所述双孔培养皿的内圈至多放入10个未成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体。

7.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述体外成熟培养的时间为24-48小时。

8.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述去除体外成熟的所述卵丘细胞-卵子-复合体周边的卵丘细胞和颗粒细胞，获得体外成熟卵母细胞，具体包括：

将所述体外成熟培养后的卵丘细胞-卵子-复合体转移到透明质酸酶溶液中放置1分钟后，用艾尔斯剥卵管D-190吹打去除所述成熟的卵丘细胞-卵子-复合体外围的颗粒细胞，再用艾尔斯D-160和D-130吹打去除卵子周边的卵丘细胞，获得成熟卵母细胞。

9.根据权利要求1所述的一种通过剖宫产获卵的生育力保存方法，其特征在于，所述将所述成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻保存，获得具有发育潜能的卵子，具体包括：

将玻璃化冷冻液分别制成玻璃化冷冻V1小滴液和V2小滴液；

将所述成熟卵母细胞置于所述玻璃化冷冻V1小滴液中平衡5-8分钟后转移到所述玻璃化冷冻V2小滴液中1钟，然后把卵子转移放置在艾尔斯封闭式载杆前段小槽内，盖好封闭保护套，轻轻放入液氮中进行玻璃化冷冻保存。

10.根据权利要求9所述的一种卵源获取未成熟卵，进行体外成熟和玻璃化冷冻的生育力保存方法，其特征在于，所述艾尔斯封闭式载杆前段小槽内放入的所述成熟卵母细胞≤2个。