[发明专利]一种靶向表达Claudin18.2细胞的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明公开了一种靶向表达Claudin 18.2(CLDN 18.2)的细胞的嵌合抗原受体。具体地公开了一种氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示的嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含：靶向Claudin 18.2的单链抗体、铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域。本发明的靶向Claudin 18.2的嵌合抗原受体，能够有效并且特异性地靶向表达Claudin 18.2表面抗原的恶性细胞(例如肿瘤细胞)，从而为治疗一些表达Claudin18.2表面抗原的肿瘤提供更高效并且副作用和不良反应更少的方法。

技术领域

本发明涉及细胞免疫治疗领域，具体涉及一种靶向表达CLDN 18.2的细胞 的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种正在兴起的肿瘤治疗方法，其通过分子生物学技术构 建嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)的表达载体，并将该表达载体 导入到从人体分离的免疫细胞中，使其细胞表面表达CAR后进行扩增培养，将 其回输至人体。表达CAR的免疫细胞能够特异性识别并结合靶细胞，通过释放 特异的免疫因子对其进行杀伤。第一代CAR-T虽然能够介导对肿瘤细胞的杀伤 作用，但是不转导增殖信号和诱导细胞因子产生，并且体内持续作用时间不长， 只能引起短暂的T细胞增殖，因此，抗肿瘤效果甚微；第二代CAR-T通过增加 共刺激分子(例如4-1BB或CD28)的胞内结构域以延长其体内存活时间，促进其 迅速扩增能力，通过构建scFv/4-1BB(或CD28)/CD3-z的CAR-T可以裂解靶细胞， 传递活化信号，产生大量的IFN-γ、IL-2等细胞因子；第二代CAR-T较第一代具 有更好的增强T细胞活化、扩增、抗肿瘤以及促进转基因表达的能力。

CAR-T在杀伤肿瘤方面具有的主要优势是：第一，由于其抗原识别结合域 能够识别肿瘤抗原，因此针对肿瘤的特异性很高；第二，由于其胞内信号传导 域可以迅速同时开启CAR-T的杀伤和扩增的下游信号，因此肿瘤杀伤效率高， CART细胞能够在体内持续扩增；第三，由于CAR-T不需要通过TCR和MHC分 子相结合的方式开启肿瘤杀伤，因此具有非MHC限制性，可以直接识别肿瘤表 面抗原，因此肿瘤的识别效率高特异性强，同时能够杀伤MHC下调的肿瘤细胞。 基于CAR-T的这些优势，CAR-T在B细胞急性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤等血 液肿瘤的治疗上已取得了显著的疗效，已获得了FDA的审批，并且在实体肿瘤 的治疗中已经显示了初步的疗效。

胃肠道和胰腺肿瘤对于人类生命是很大的威胁，虽然手术治疗、放化疗、 介入治疗等治疗手段对于该类肿瘤有一定疗效，但患者生存率仍无显著改善。 目前，备受关注的CAR-T细胞治疗技术有望成为治疗的突破口。

由于癌胚抗原Claudin 18.2(CLDN18.2)在正常组织表达的高度特异性及在 多种癌症中被激活表达，因此针对上皮性肿瘤，CLDN18.2成为极具潜力的靶点， CLDN 18.2是一种广谱性肿瘤标志物，可在多种肿瘤中表达。

因此，本领域亟待开发一种新的有效治疗多种表达CLDN18.2的肿瘤的免疫 治疗方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向表达Claudin 18.2的细胞的嵌合抗原受体 及其在肿瘤治疗中的应用。

本发明的第一方面，提供了一种靶向表达Claudin 18.2的细胞的嵌合抗原 受体，所述嵌合抗原受体氨基酸序列如SEQ ID NO.:14所示，并且其包含：靶 向CLDN 18.2的单链抗体、铰链区、跨膜结构域和细胞内信号结构域，其中所 述的靶向CLDN 18.2的单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。

在另一优选例中，所述的CAR具有如式I所示的结构：

L-scFv-H-TM-C-CD3ζ (式I)

其中，

L为无或信号肽序列；