[发明专利]一种rRNA沉默的RNA文库构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种5’端封闭的rRNA特异性寡核苷酸，其特征在于，具有5’端封闭模块和3’端rRNA特异性序列，所述封闭模块阻断5’末端的连接，所述rRNA特异性序列与rRNA靶序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％互补，

任选地，所述5’端封闭模块是对5’末端核苷(酸)的5’-磷酸基团或5’-羟基的修饰，进一步任选地，所述修饰是5’-磷酸基团的酯化或酰胺化或5’-羟基的酯化或醚化，或者，所述修饰是5’位连接间隔子序列，

任选地，所述3’端rRNA特异性序列和/或所述rRNA靶序列具有例如4nt至100nt、6nt至75nt、10nt至60nt、20nt至50nt或30nt至40nt的长度，包括所述范围内的任一整数的长度，例如4nt、5nt、6nt、7nt、8nt、9nt、10nt、11nt、12nt、13nt、14nt、15nt、20nt、25nt、30nt、35nt、40nt、45nt、50nt、55nt、60nt、65nt、70nt或75nt的长度。

2.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，所述rRNA特异性序列是对28S、26S、25S、18S、16S、12S、5.8S或5S真核rRNA或23S、16S或5S原核rRNA特异性的，和/或所述rRNA靶序列来自28S、26S、25S、18S、16S、12S、5.8S或5S真核rRNA或23S、16S或5S原核rRNA。

3.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，所述rRNA靶序列是rRNA的保守序列或共有序列。

4.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，所述3’端rRNA特异性序列包含简并核苷酸和/或经过修饰的碱基。

5.一种寡核苷酸集合，其特征在于，包含多种根据权利要求1-4任一项所述的寡核苷酸，且是对同一类rRNA，例如28S、26S、25S、18S、16S、12S、5.8S或5S真核rRNA或23S、16S或5S原核rRNA之一特异性的，

任选地，所述多种寡核苷酸的rRNA靶序列在所述rRNA上彼此交叠、毗邻、断续或其任意组合，

任选地，所述多种寡核苷酸的rRNA靶序列在所述rRNA上均匀或不均匀分布，

任选地，所述寡核苷酸集合的3’端rRNA特异性序列和/或rRNA靶序列具有例如约4nt至100nt、6nt至75nt、10nt至60nt、20nt至50nt或30nt至40nt的平均长度，包括所述范围内的任一数值的平均长度，例如约4nt、5nt、6nt、7nt、8nt、9nt、10nt、11nt、12nt、13nt、14nt、15nt、20nt、25nt、30nt、35nt、40nt、45nt、50nt、55nt、60nt、65nt、70nt或75nt的平均长度，

任选地，所述寡核苷酸集合的rRNA靶序列覆盖所述rRNA的全长的至少约10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％。

6.一种寡核苷酸混合物，其特征在于，包含至少两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种根据权利要求5所述的寡核苷酸集合，第一寡核苷酸集合是对第一类rRNA，例如28S、26S、25S、18S、16S、12S、5.8S或5S真核rRNA或23S、16S或5S原核rRNA之一特异性的，第二寡核苷酸集合是对第二类rRNA，例如28S、26S、25S、18S、16S、12S、5.8S或5S真核rRNA或23S、16S或5S原核rRNA之一特异性的，第一类rRNA不同于第二类rRNA，以此类推，

任选地，所述寡核苷酸混合物包含对全部真核rRNA和/或全部原核rRNA特异性的多种寡核苷酸集合。

7.根据权利要求1-4任一项所述的寡核苷酸或根据权利要求5所述的寡核苷酸集合或根据权利要求6所述的寡核苷酸混合物，其用作引物。