[发明专利]一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒

说明书

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，试剂盒包括检测卡和样品裂解液，检测卡的内部设有试纸条，试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP‑Ⅱ单克隆抗体1；检测卡的上板块上设有加样口和样品裂解液口，加样口的位置与金标垫的位置相对应，样品裂解液口与样品垫的位置相对应。该试剂盒在实际应用中，灵敏度高，特异性强。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒。

背景技术

疟疾是一种严重威害人类健康的感染性寄生虫病。疟原虫是引起疟疾的病原体，主要包括4 种：恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。

疟疾尚无有效疫苗，若发生症状24 h 内不采取对症治疗，疟疾会严重威胁生命造成死亡。

目前主要检测方式有镜检法、血液棕黄层定量分析、 DNA探针技术、聚合酶链式反应技术、凝聚法、酶联免疫吸附法（ELISA），虽然上述方法都可以用于检测疟原虫，但是都存在相应的缺点：镜检法存在费工费时，对客观依赖性太强的缺点；血液棕黄层定量分析存在的主要问题是：成本较高，需要荧光显微镜，所使用的QBC管价格昂贵（1.0美元/支），且不能重复使用；DNA探针技术：操作繁琐，成本较高，还需要使用放射标记，限制了其现场应用。聚合酶链式反应技术对实验条件和技术水平要求较高，投入成本较大；凝聚法存在的问题是灵敏度和特异度较差；酶联免疫吸附法（ELISA）存在的问题是必须由专业人员操作，而操作又极繁琐，需逐一有序地加入全血、标记单抗、底物、终止液等试剂，中间还有多次清洗操作，耗时较久，一次试验要2h以上。因此针对上述问题，有必要开发一种操作简单，使用方便，灵敏度高和特异性高的试剂盒产品。

发明内容

本发明的第一个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供一种具有灵敏度高、特异性强、操作简单以及使用方便的用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种用于检测恶性疟和间日疟的试剂盒，所述试剂盒包括检测卡和样品裂解液，所述检测卡的内部设有试纸条，所述试纸条包括样品垫、金标垫和异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述金标垫上设有抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1；所述检测卡的上板块上设有加样口和样品裂解液口，所述加样口的位置与金标垫的位置相对应，所述样品裂解液口与所述样品垫的位置相对应。

作为一种改进的技术方案，金标垫的制备方法包括胶体金的制备和胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1；其中制备得到的胶体金溶液pH 为8.2～8.5；胶体金标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体1和抗恶性疟原虫HRP-Ⅱ单克隆抗体1时将pLDH单克隆抗体1和HRP-Ⅱ单克隆抗体1同时加入金标液中搅拌，再加入牛血清白蛋白搅匀，最后加入6～10wt%NaCl溶液混匀、离心、弃沉淀后上清液继续离心，吸去上清液，将沉淀物用 PBS缓冲液溶解得到复溶后胶体金标物；取玻璃纤维放入不锈钢盘，按体积浓度20%稀释后，量取胶体金标物40～50mL倒入不锈钢盘，使金溶液完全均匀吸收、干燥即可。

作为一种改进的技术方案，异嗜性抗体阻断剂结合物垫的制备方法：取玻璃纤维放入不锈钢盘，取30～40mL且浓度为0.2～0.5mg/mL异嗜性抗体阻断剂溶液,倒入不锈钢盘，使液体完全均匀吸收、干燥，得阻断剂结合物垫。

作为一种改进的技术方案，所述试纸条还包括吸水纸、硝酸纤维素膜和底板，其中所述底板的中间位置粘贴有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端搭接吸水纸，所述硝酸纤维素膜的另一端搭接异嗜性抗体阻断剂结合物垫，所述异嗜性抗体阻断剂结合物垫的另一端搭接金标垫，所述金标垫的一端搭接样品垫。