[发明专利]一种重组角蛋白液体制剂及其纯度检测方法

说明书

本发明涉及一种重组角蛋白液体制，按照质量百分比计，包括重组角蛋白0.1％～0.2％，稳定剂8％～15％，防腐抑菌剂0.01％～0.05％，其余成分为无菌水。还公开了一种重组角蛋白液体制剂的纯度检测方法，包括高效液相色谱法，色谱柱采用适合分离分子量为5～1250KDa蛋白质的凝胶为填充剂，流动相采用0.08％TFA‑乙腈和0.1％TFA‑水；上样量不低于10μL，在波长280nm处检测，以重组角蛋白色谱峰计算的理论塔板数应不低于16000，最后按面积归一化法计算。本发明将重组的角蛋白制备成液体制剂进行保存，使得能够保证重组角蛋白结构保持稳定，避免出现角蛋白降解或者聚集的情况，使得重组角蛋白能够长时间保持较好的活性，从而有效的保证了重组角蛋白在保存过程中纯度变化不大。

技术领域

本发明涉及角蛋白技术领域，尤其是涉及一种重组角蛋白液体制剂及其纯度检测方法。

背景技术

角蛋白是一类具有缔结和保护功能的纤维状动物蛋白质，是外胚层细胞的结构蛋白，广泛存在于动物的毛发、羽毛和蹄中；由于角蛋白具有良好的生物活性高和组织相容性，能够起到消炎、止血、神经修复、减少创面渗出和促进创伤组织再生，修复、愈合的作用，可在体内生物降解，因此可以作为良好的生物医学材料。但是现在的角蛋白都是通过复杂的化学工艺从动物中提取角蛋白后进行使用，一方面导致提取过程中容易造成角蛋白的结构进行破坏，并且角蛋白会残留一定的分离试剂，导致角蛋白的安全性和有效性都无法保证。

因此，现在市场上为了避免提取工艺对角蛋白造成的各种影响，专利号为201810123711.6提供了一种重组角蛋白，可以获得稳定安全、结构完整和有效的角蛋白；但是重组角蛋白直接保存导致出现结构不稳定，出现降解或者聚集的情况，活性会受到严重影响，并且导致重组角蛋白的纯度受到影响，严重影响重组角蛋白有效性和应用范围。并且现有技术不能对制剂中重组角蛋白的纯度进行检测。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明提供一种重组角蛋白液体制剂及其纯度检测方法，解决了现在重组角蛋白直接保存结构不稳定，出现降解或者聚集的情况，重组角蛋白的活性和纯度被严重影响以及无法检测制剂中重组角蛋白的纯度等技术问题。

为了实现前述发明目的，本发明提供了一种重组角蛋白液体制剂，按照质量百分比计，包括：重组角蛋白0.1％～0.2％，稳定剂8％～15％，防腐抑菌剂0.01％～0.05％，其余成分为去离子水。

优选地，所述稳定剂包括甘油，NaCl和蔗糖的一种或者任意几种。本发明中采用甘油和蔗糖作为稳定剂，能够增强重组角蛋白的稳定性，一方面能够阻止重组角蛋白在长时间的储存过程中二级结构的变化；另外一方面还能防止重组角蛋白在反复冻融过程中失活，有效避免重组角蛋白在长时间保存过程中出现降解或者聚集的现象，保证重组角蛋白的活性和纯度。

优选地，所述稳定剂包括甘油5％～8％，NaCl1％～2％，蔗糖2％～5％。

优选地，所述稳定剂包括甘油6％～7％，NaCl1.5％，蔗糖3％～4％。

优选地，所述防腐抑菌剂为叠氮钠。本发明中采用叠氮钠能够对保存的重组角蛋白进行防腐和抑菌，确保重组角蛋白长时间保存后仍然具有良好的品质。

优选地，所述叠氮钠的含量为0.02％～0.04％。

优选地，所述重组角蛋白的分子量为47KDa。

一种重组角蛋白液体制剂的纯度检测方法，包括高效液相色谱法，色谱柱采用适合分离分子量为5～1250KDa蛋白质的凝胶为填充剂，流动相采用0.08％TFA-乙腈(含0.4mlTFA和500ml乙腈混合液体)和0.1％TFA-水(含0.5mlTFA和500ml去离子水)；上样量不低于10μL，在波长280nm处检测，以重组角蛋白色谱峰计算的理论塔板数应不低于16000，最后按面积归一化法计算。

优选地，所述色谱柱为SEC300凝胶色谱柱。