[发明专利]一种大规模分离干细胞旁分泌蛋白与分泌体囊泡的方法

权利要求书

1.一种大规模分离干细胞旁分泌蛋白与分泌体囊泡的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将血细胞分离管路接入血细胞分离机上；

(2)向血细胞分离管路通入生理盐水预充管路；

(3)将中空纤维膜孔径为200nm的血浆过滤器接入到血细胞分离管路中，并使用2000mL生理盐水冲洗血浆过滤器；

(4)设置血细胞分离机的参数，根据过滤体积，在设备上设置分离体积，设置区间为500～5000mL，流速设置为30～80mL/min；

(5)将装有干细胞上清液的袋子与血细胞分离管路的进液路连接，将空的无菌收集袋与血细胞分离管路的出液路连接；

(6)启动血液细胞分离机，执行分离程序；分离结束后，无菌收集袋中得到分子直径＜200nm的滤液，取下中空纤维膜孔径为200nm的血浆过滤器，换上中空纤维膜孔径为20nm的血浆过滤器，同时取下装有滤液的无菌收集袋，并使用2000mL生理盐水冲洗血细胞分离管路和血浆过滤器；

(7)将新的空无菌收集袋接入血细胞分离管路的收集管路，装有滤液的无菌收集袋接入血细胞分离管路的进液路；

(8)再次启动血细胞分离机，执行分离程序，原滤液中粒径＞20nm的粒子将会被截留，旁分泌蛋白与外泌体囊泡直径多数＞20nm，被截留下来，进入接在收集管路的无菌收集袋，即可获得旁分泌蛋白与外泌体囊泡混合物。

2.根据权利要求1所述的大规模分离干细胞旁分泌蛋白与分泌体囊泡的方法，其特征在于：所述血细胞分离管路包括，进液路、盐水入口、离心管盘、压力感应头、回流路、回流阀、收集路和出液路，其中离心管盘、压力感应头和回流阀均为血细胞分离机的组成部分。

3.根据权利要求1所述的大规模分离干细胞旁分泌蛋白与分泌体囊泡的方法，其特征在于：所述血细胞分离机选用德国造的血细胞分离机COM.TEC。