[发明专利]转录因子ORCA3沉默型长春花培养体系的构建方法及其应用

权利要求书

1.权利要求1所述转录因子ORCA3沉默型长春花培养体系的构建方法及其应用。将长春花的ORCA3基因片段重组到含有大麦条纹花叶病毒(Barley Stripe Mosaic Virus，BSMV)RNAγ的载体pCa-γbLIC中的LIC位点上，并联合大麦条纹花叶病毒的其他两个病毒RNA，RNAα和RNAβ沉默烟草叶片中的ORCA3基因，通过烟草的瞬时表达产生大量的ORCA3沉默相关蛋白，并将其接种于长春花叶片中以沉默长春花叶片中的ORCA3基因。包括以下方法和步骤：

(1)构建ORCA3沉默载体BSMV：ORCA3₃₀₀，并其转入农杆菌EHA105中；

(2)ORCA3沉默载体体系侵染本生烟草叶片，并在叶片中提取病毒蛋白；

(3)病毒蛋白接种长春花叶片，使长春花叶片ORCA3基因沉默；

(4)qRT-PCR法检测长春花叶片中萜类吲哚生物碱生物合成关键酶基因D4H，LAMT，TDC，G10H，GES，IRS，SGD，STR，关键转录调控因子ORCA3基因的表达水平。

2.权利要求2所述将长春花叶片中的ORCA3基因沉默后，D4H，G10H，GES，IRS，LAMT，STR，TDC等酶基因的表达量大幅度下降。