[发明专利]一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法

权利要求书

1.一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法，其特征在于，包括脱毒组培过程和驯化培育过程，所述脱毒组培过程用于将泡桐外植体组培得到组培生根苗，所述驯化培育过程用于将所述组培生根苗驯化得到木质化泡桐苗。

2.根据权利要求1所述的一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法，其特征在于，所述脱毒组培过程包括以下步骤：

1-1、泡桐外植体预处理：在取泡桐外植体前5天，提前对泡桐外植体根部喷洒保护性杀菌剂；

1-2、培养基制作：选用MS培养基，并额外添加1.5mg/L的6-BA、30g/L的白糖和7g/L的卡拉胶，使用多个相同规格的聚乙烯袋子分别装入24～26ml的上述培养基，再将上述装有培养基的聚乙烯袋子同时装入牛皮纸纸袋中，每个牛皮纸袋装10个聚乙烯袋子,并放入高压灭菌锅灭菌20～25分钟；

1-3、泡桐外植体消毒：使用洗衣粉对泡桐外植体的幼根进行流水清洗，之后置于超净工作台上使用75％酒精进行2-3分钟的表面消毒，在之后使用500ml广口瓶添加含量为0.1％的氯化汞加1～2滴洗洁精浸泡摇晃消毒14～15分钟，最后采用无菌水冲洗4—5遍即可进行下一步骤；

1-4、切割分离：选用平整的经过高温灭菌后的牛皮纸作为垫子，在牛皮纸上将泡桐外植体切成1cm长度根段并接种至步骤1-2得到的聚乙烯袋子内的培养基上；

1-5、初代培养：接种好的带有泡桐外植体根段的聚乙烯袋子置于培养室组培架，之后将带所述培养架置于27～30℃温度环境的培养室中暗光培养一周，其后每天使用LED灯带光照8h，培养18～20天至每个泡桐外植体根段长出5—10个不定芽；

1-6、继代培养：切下不定芽0.5mm茎尖和0.5mm带叶茎段转接到附加6-BA1g/L的MS培养基上，暗培养7天后，每天给予光照4小时，15天后每天光照8小时；待不定芽长至5cm左右再进行转接；

1-7、生根培养：将不定芽切成0.5cm带叶片茎段转接到附加NAA0.5mg/L的50％含量MS培养基中进行生根培养，暗培养4天左右基部开始有根萌动，此后每天光照8h，培养25天植株长至5cm左右，得到组培生根苗。

3.根据权利要求1所述的一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法，其特征在于，所述驯化培育过程包括以下步骤：

2-1、驯化环境及基质调配：采用里层遮光度70％，外层遮光度50％的两层遮阳网防雨育苗棚；基质为椰糠、珍珠岩和煤灰，拌匀后装入12cm*12cm规格营养杯，基质浇透水，盖上薄膜进行发酵，在种苗前5天用添加含量为0.2％平衡复合肥及稀释800～1000倍的70％甲基硫菌灵水溶液浇湿；

2-2、炼苗：把脱毒组培过程中得到的组培生根苗置于步骤2-1两层遮阳网下炼苗5天，此时组培生根苗的叶子肉眼可见变厚变绿；

2-3、洗苗、种苗：用剪刀将步骤2-2带有组培生根苗的聚乙烯袋子剪开，并使用清水将组培生根苗根系培养基洗净，用稀释800～1000倍代森锰锌溶液浸泡2分钟捞出得到泡桐苗；

2-4后期管理：将泡桐苗下种5～6天，开膜用稀释800～1000倍的70％甲基硫菌灵或稀释800～1500倍的80％多菌灵溶液杀菌后使用生根剂喷洒，再盖上薄膜；13～17天后拆掉里层遮阳网增加光照，18～22天后，泡桐苗长至9cm以上即可开膜进行炼苗；炼苗一周后使用用0.1％尿素加0.2％平衡复合肥进行浇肥；浇肥一周后用剪刀修剪泡桐苗顶尖得到泡桐苗嫩叶，加快泡桐苗木质化过程；

2-5、泡桐苗嫩叶自身利用：修剪得到的泡桐苗嫩叶加入生物菌放置密封罐进行发酵，发酵一周后取发酵液稀释200倍用于剪顶后的泡桐苗追肥；

2-6、出苗：泡桐苗驯化60天后，拆除遮阳网外层，让泡桐苗全光照炼苗，待茎干完全木质化即可得到木质化泡桐苗。

4.根据权利要求2所述的一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法，其特征在于，所述步骤1-1的保护性杀菌剂为稀释800～1000倍的80％代森锰锌水溶液或者稀释800～1500倍的80％多菌灵水溶液。

5.根据权利要求2所述的一种泡桐树苗脱毒组培及驯化培育的方法，其特征在于，所述步骤1-2的聚乙烯袋子规格为11cm*14cm，牛皮纸纸带规格为17cm*12cm*26cm，所述步骤1-4的牛皮纸规格为12cm*18cm。