[发明专利]由贴壁细胞在生物反应器中产生病毒

权利要求书

1.一种用于产生病毒的方法，其包括：

a)在生物反应器中培养包含病毒的宿主细胞，其中所述生物反应器包含用于生长贴壁细胞的基质，其中：

所述基质是生物相容的，并且所述基质是捕获细胞的密度或所述基质是细胞粘附至其的基质，从而所述细胞被捕获在所述基质中和/或粘附至所述基质；并且

所述基质的密度使得所述细胞保持被捕获和/或所述基质是在细胞被裂解和处理以释放所述病毒的条件下细胞保持附着至其的基质，并且通过所述基质的加工培养基流足以使细胞生长；

b)处理捕获在所述基质中和/或粘附至所述基质的细胞以使其裂解并将所述病毒释放至所述生物反应器中的所述加工培养基中，其中裂解的细胞保持粘附至所述基质和/或被捕获在所述基质中；并且然后

c)在不进一步处理所述加工培养基以去除细胞或细胞碎片的情况下，并且仅在一个或两个步骤中，从所述加工培养基纯化所释放的病毒，其中：

一个步骤是超滤或透析过滤；并且两个步骤是超滤和透析过滤。

2.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞是贴壁细胞。

3.权利要求1或2的方法，其中在纯化所述病毒之前收获所述生物反应器中的培养基；并且任选地储存所述培养基。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述病毒的纯化步骤c)在1天或更短时间内实现。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其基本上由步骤a)、b)和c)组成。

6.权利要求1至4中任一项的方法，其由步骤a)、b)和c)组成。

7.权利要求1至5中任一项的方法，其基本上由步骤a)、b)和c)组成，其中裂解步骤b)包括用蛋白酶和/或核酸酶处理以从所述捕获的细胞和/或贴壁细胞中释放病毒。

8.权利要求1至5中任一项的方法，其由步骤a)、b)和c)组成，其中裂解步骤b)包括用蛋白酶和/或核酸酶处理以从所述捕获的细胞和/或贴壁细胞中释放病毒。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述细胞是细胞系。

10.权利要求1至9中任一项的方法，其中所述细胞是作为细胞系的贴壁细胞。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述病毒是治疗性病毒。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述病毒是包膜病毒。

13.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述病毒选自新城疫病毒、细小病毒、痘苗病毒、粘液瘤病毒、麻疹病毒、呼肠孤病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、腺病毒、腺相关病毒、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒、辛德毕斯病毒和塞内卡谷病毒，以及它们的经修饰以含有编码异源基因产物的核酸的衍生物。

14.权利要求1至13中任一项的方法，其中所述病毒是溶瘤病毒。

15.权利要求14的方法，其中所述溶瘤病毒是痘苗病毒。

16.权利要求15的方法，其中溶瘤性痘苗病毒选自李斯特、西储(WR)、哥本哈根(Cop)、伯尔尼、巴黎、塔什干、天坛、惠氏(DRYVAX)、IHD-J、IHD-W、布莱顿、安卡拉、CVA382、JX-594、修饰的痘苗安卡拉(MVA)、大连I、LC16m8、LC16m0、LIVP、ACAM2000、WR 65-16、康诺特、纽约市卫生局(NYCBH)、EM-63和NYVAC株。

17.权利要求15的方法，其中所述痘苗病毒是李斯特株病毒。