[发明专利]RNA指导核酸酶及其活性片段与变体以及使用方法在审
| 申请号： | 202080097713.8 | 申请日： | 2020-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN115190912A | 公开（公告）日： | 2022-10-14 |
| 发明（设计）人： | A·B·克拉维利;P·博登;T·D·博文;M·寇伊勒;M·R·拉科尔;T·D·埃里驰 | 申请（专利权）人： | 生命编辑制药股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N9/22;C12N15/63 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 张小勇 |
| 地址： | 美国北*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | rna 指导 核酸酶 及其 活性 片段 变体 以及 使用方法 | ||
1.一种核酸分子，包含编码RNA指导核酸酶(RGN)多肽的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含编码RGN多肽的核苷酸序列，所述RGN多肽包含与SEQ ID NO:2、4、1、3和5至109中任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
其中当与能够与DNA分子的目标DNA序列杂交的指导RNA(gRNA)结合时，所述RGN多肽能够以RNA指导的序列特异性方式结合所述目标DNA序列，且
其中编码RGN多肽的所述多核苷酸可操作地连接至与所述多核苷酸异源的启动子。
2.如权利要求1所述的核酸分子，其中所述RGN多肽包含与SEQ ID NO:2、4、1、3和5至109中任一个具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。
3.如权利要求1所述的核酸分子，其中所述RGN多肽包含与SEQ ID NO:2、4、1、3和5至109中任一个具有100％序列同一性的氨基酸序列。
4.如权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中所述目标DNA序列位于为单链的所述DNA分子的区域内。
5.如权利要求4所述的核酸分子，其中所述RGN多肽能够在结合时切割所述目标DNA序列。
6.如权利要求1至3中任一项所述的核酸分子，其中所述目标DNA序列位于为双链的所述DNA分子的区域内。
7.如权利要求6所述的核酸分子，其中所述RGN多肽能够在结合时切割所述目标DNA序列。
8.如权利要求7所述的核酸分子，其中通过所述RGN多肽的切割产生双链断裂。
9.如权利要求7所述的核酸分子，其中通过所述RGN多肽的切割产生单链断裂。
10.如权利要求6至9中任一项所述的核酸分子，其中所述RGN多肽与碱基编辑多肽可操作地融合。
11.如权利要求10所述的核酸分子，其中所述碱基编辑多肽为脱氨酶。
12.如权利要求6至11中任一项所述的核酸分子，其中所述目标DNA序列位于与前间隔序列邻近基序(PAM)相邻的位置。
13.如权利要求1至12中任一项所述的核酸分子，其中所述RGN多肽包含一种或多种核定位信号。
14.如权利要求1至13中任一项所述的核酸分子，其中所述RGN多肽针对在真核细胞中的表达而被密码子优化。
15.一种包含如权利要求1至14中任一项所述的核酸分子的载体。
16.如权利要求15所述的载体，还包含至少一个核苷酸序列，所述至少一个核苷酸序列编码能够与所述目标DNA序列杂交的所述gRNA。
17.如权利要求16所述的载体，其中所述RGN多肽包含与SEQ ID NO:11具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，且所述gRNA包含CRISPR RNA，所述CRISPR RNA包含与SEQ ID NO:116具有至少90％序列同一性的CRISPR重复序列。
18.如权利要求16所述的载体，其中所述RGN多肽包含与SEQ ID NO:11具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，且所述gRNA包含CRISPR RNA，所述CRISPR RNA包含与SEQ ID NO:116具有至少95％序列同一性的CRISPR重复序列。
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