[发明专利]具有可替换匹配的链间半胱氨酸的双特异性抗体及其用途

权利要求书

1.一种分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，包括：

a.第一重链，H1；

b.第二重链，H2；

c.第一轻链，L1；和

d.第二轻链，L2；

其中Hl和Ll形成第一臂，其包含特异性结合第一抗原，优选人源的第一抗原的第一抗原结合结构域，和

其中H2和L2形成第二臂，其包含特异性结合第二抗原，优选人源的第二抗原的第二抗原结合结构域，其中

(a)H1包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的CH1区；和

(b)L1包含人κ轻链或人λ轻链的CL区；

其中CH1和CL区在对应于CH1的SEQ ID NO：15、21、22或23和CL的SEQ ID NO：19或24的氨基酸位置的氨基酸残基处包含氨基酸取代或天然氨基酸；

其中CH1和CL区的氨基酸取代或天然氨基酸选自：

(1)CH1中的K133C和C220X，以及CL中的F209C和C214X；

(2)CH1中的S131C和C220X，以及CL中的P119C和C214X；

(3)CH1中的K133C和C220X，以及CL中的K207C和C214X；

(4)CH1中的F170C和C220X，以及CL中的S176C和C214X；

(5)CH1中的P171C和C220X，以及CL中的S162C和C214X；

(6)CH1中的V173C和C220X，以及CL中的Q160C和C214X；

(7)CH1中的F170C和C131X，以及CL中的S176C和C214X；

(8)CH1中的P171C和C131X，以及CL中的S162C和C214X；

(9)CH1中的V173C和C131X，以及CL中的Q160C和C214X；

(10)CH1中的A129C和C220X，以及CL中的S121C和C214X；

(11)CH1中的K133C和C220X，以及CL中的I117C和C214X；

(12)CH1中的C131，以及CL中的P119C和C214X；

(13)CH1中的A129C和C131X，以及CL中的S121C和C214X；

(14)CH1中的R133C和C131X，以及CL中的K207C和C214X；

(15)CH1中的R133C和C131X，以及CL中的I117C和C214X；

(16)CH1中的R133C和C131X，以及CL中的L117C和C214X；

(17)CH1中的K133C和C220X，以及CL中的L117C和C214X；

(18)CH1中的R133C和C131X，以及CL中的F209C和C214X；

(19)CH1中的R133C和C131X，以及CL中的V209C和C214X；或者

(20)CH1中的K133C和C220X，以及CL中的V209C和C214X；

其中X选自S、A或G。

2.一种分离的双特异性抗体或其抗原结合片段，包括：

a.第一重链，H1；

b.第二重链，H2；

c.第一轻链，L1；和

d.第二轻链，L2；

其中Hl和Ll形成第一臂，其包含特异性结合第一抗原，优选人源的第一抗原的第一抗原结合结构域，和

其中H2和L2形成第二臂，其包含特异性结合第二抗原，优选人源的第二抗原的第二抗原结合结构域，其中

(a)H1包含人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的CH1区和重链可变区(VH区)；和

(b)L1包含人κ轻链或人λ轻链的CL区和轻链可变区(VL区)；

其中CH1区、VH区、CL区和VL区在对应于CH1的SEQ ID NO:15、21、22或23，VH的SEQ IDNO:13，CL的SEQ ID NO:19或24和VL的SEQ ID NO:17的氨基酸位置的氨基酸残基处包含氨基酸取代；

其中CH1区、VH区、CL区和VL区中的氨基酸取代选自：

(1)CH1中的C220X，VH中的G44C，CL中的C214X和VL中的G101C；或者

(2)CH1中的C131X，VH中的G44C，CL中的C214X和VL中的G101C；

其中X选自S、A或G。