[发明专利]用于增强树突细胞和T细胞激活以及用于诱导Th-1免疫应答的体外方法和组合物

说明书

本公开提供了用于获得增强的抗原特异性Th1免疫应答的组合物和体外或离体方法。该组合物可以包含在体外产生的激活增强的树突细胞或T细胞。该方法包括使未成熟的树突细胞与包含树突细胞成熟剂、干扰素γ和炎症激活脂质的成熟剂接触，其可以产生过度激活的树突细胞。该方法可以进一步包括在成熟过程中使成熟的树突细胞与预定抗原接触。还提供了一种体外或离体方法，其中过度活跃的树突细胞可用于诱导幼稚T细胞激活，其中将激活的T细胞制剂用于向需要此类治疗的个体施用。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年10月7日提交的美国临时申请号62/912,005的权益，其公开内容以其全文并入本文。

背景技术

抗原呈递细胞(APC)在引发有效免疫应答方面具有重要性。它们不仅将抗原呈递至具有抗原特异性T细胞受体的T细胞，而且还提供T细胞激活所必需的信号。这些信号尚未完全确定，但涉及多种细胞表面分子以及细胞因子或生长因子。激活幼稚或非极化T细胞所需的因素可能与重新激活记忆T细胞所需的因素不同。APC呈递抗原和传递T细胞激活信号的能力通常称为辅助细胞功能。尽管单核细胞和B细胞已被证明是活性APC，但它们的抗原呈递能力似乎仅限于它们对先前致敏T细胞的激活。因此，它们无法直接激活功能性幼稚或静息T细胞群。

树突细胞(DC)是免疫系统的专门抗原呈递细胞，其被认为能够激活幼稚T细胞和记忆T细胞。树突细胞越来越多地离体制备用于免疫疗法，特别是癌症的免疫疗法。制备具有最佳免疫刺激特性的树突细胞需要了解和利用这些细胞的生物学来进行离体培养。已经描述了用于培养这些细胞的各种方案，每种方案各有优点。最近的方案包括使用无血清培养基，以及采用赋予培养细胞期望的免疫刺激特性的成熟条件。

树突细胞成熟是将与皮肤Langerhans细胞表型相似的未成熟DC转化为可以迁移至淋巴结的成熟抗原呈递细胞的过程。该过程导致表征未成熟的树突细胞的强抗原摄取能力丧失，并导致共刺激细胞表面分子和各种细胞因子的表达上调。

许多已知的成熟方案基于DC被认为在暴露于抗原期间或之后遇到的体内环境。这种方法的最佳实例是使用单核细胞条件培养基(MCM)作为细胞培养基。MCM通过培养单核细胞在体外产生并用作成熟因子来源。有报道表明MCM中负责成熟的主要组分是(促)炎症细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)。其他成熟因子包括前列腺素E2(PGE2)、poly-dIdC、血管肠肽(VIP)、细菌脂多糖(LPS)、卡介苗(BCG)，以及其他分枝杆菌或分枝杆菌的组分，例如特定的细胞壁成分。

已报道通过将干扰素γ(IFNγ)与某些树突细胞成熟因子(例如细菌脂多糖(LPS)、BCG和CD40L)组合来增强树突细胞的IL-12产生。然而，LPS、BCG和CD40L已知具有在成熟过程中诱导少量IL-12的能力。此外，BCG已显示可诱导大量IL-10，因此最初认为单独使用时可诱导Th2免疫应答。现已表明，当添加至体外培养的未成熟的树突细胞中时，添加IFNγ与LPS、BCG或CD40L组合时可增强IL-12的产生。干扰素γ信号传导使用Jak2-Stat1通路，其包括Stat1的第701位酪氨酸残基在其迁移至细胞核之前的酪氨酸磷酸化和继而发生的干扰素γ反应基因转录的增强。然而，关于人单核细胞来源的树突细胞中的信号转导通路仍知之甚少。这些细胞中IFNγ作用的机制尚未完全确定。

最近，已表明过度活跃的DC从细胞质(例如，IL-1β)和生物合成途径(例如，TNFα)分泌炎性细胞因子，同时保持活力。这些属性已通过多种微生物或宿主来源的产物(包括氧化磷脂(例如氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxPAPC))、其取代物和衍生物的混合物)实现。