[发明专利]用于增强树突细胞和T细胞激活以及用于诱导Th-1免疫应答的体外方法和组合物

权利要求书

1.要求专有权或特权的本发明的实施方案定义如下：

一种用于产生富集过度活跃的成熟的树突细胞的细胞群的体外或离体方法，所述成熟的树突细胞对预定抗原产生增强的免疫应答，所述方法包括：

提供未成熟的树突细胞；和

在适合所述未成熟的树突细胞成熟的培养条件下，使所述未成熟的树突细胞与有效量的树突细胞成熟剂，有或没有干扰素γ(IFNγ)，和炎症激活脂质接触一段时间足以形成成熟的树突细胞；

其中成熟的树突细胞群在与幼稚T细胞接触时对所述抗原产生增强的Th1应答。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述树突细胞成熟剂是Toll样受体(TLR)激动剂，优选地，其中所述TLR激动剂是TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR7激动剂和/或TLR8激动剂，或TLR9，更优选地，其中所述TLR4激动剂是LPS或BCG，TLR7和/或TLR8激动剂为咪唑喹啉化合物，优选是咪唑喹啉-4-胺化合物，更优选是4-氨基-2-乙氧基甲基-α,α-二甲基-1H-咪唑[4,5-c]喹啉-1-乙醇(R848)或1-(2-甲基丙基)-lH-咪唑并[4,5-c]喹啉-4-胺(R837)及其衍生物，所述TLR3激动剂是合成的双链多核糖核苷酸，优选是poly I:C或poly[I]:poly[C(12)U]，或TLR9激动剂是含有已知诱导DC成熟的未甲基化的CpG基序的核酸序列，或其任何组合。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述炎症激活脂质是以下项中的一种或更多种：氧化的1-棕榈酰-2-花生四烯酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(oxPAPC)、1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰基)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(POV-PC)、1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(PGPC)和1-棕榈酰-2-(5,6-环氧异丙烷E₂)-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(PEIPC)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代-6-辛烯二酰基)sn-甘油-3-磷酸胆碱(HOdiA-PC)、1-棕榈酰-2-(5-酮-6-辛烯二酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(KOdiA-PC)、1-棕榈酰-2-(5-羟基-8-氧代辛基-6-烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(HOOA-PC)、1-棕榈酰-(5-酮-8-氧代-6-辛烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(KOOA-PC)。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中在添加所述炎症激活脂质之前使所述未成熟的树突细胞与所述树突细胞成熟剂接触至少约3小时，并且将所述树突状细胞培养另外约1至24小时或更长时间。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在使所述未成熟的树突细胞与所述树突细胞成熟剂，有或没有IFNγ，和氧化的炎症激活脂质接触之前、同时或之后，使成熟树突细胞与预定抗原接触。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述预定抗原是肿瘤特异性抗原、肿瘤相关抗原、病毒抗原、细菌抗原、肿瘤细胞、细菌细胞、细菌或肿瘤细胞裂解物、细菌或肿瘤细胞膜制剂、重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原。

7.根据权利要求6的方法，其中所述重组产生的抗原、肽抗原或分离的抗原是细菌的、肿瘤相关的或肿瘤特异性抗原、肽抗原或分离的抗原。

8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：

获得富集单核树突细胞前体的细胞群；和

在存在树突细胞分化剂的情况下培养所述前体以形成所述未成熟的树突细胞。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述树突细胞分化剂是GM-CSF，或GM-CSF与白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素7(IL-7)、白细胞介素13(IL-13)或白细胞介素15(IL-15)的组合。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述单核树突细胞前体分离自人受试者。