[发明专利]使用离子浓度提高重组腺相关病毒的包装效率

权利要求书

1.一种提高重组修饰腺相关病毒(rAAV)的生产滴度的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(A)在足以允许生产rAAV的条件下，将用所述rAAV转染的细胞在初始培养基中培养初始时间，其中所述细胞还含有AAV辅助功能提供多核苷酸和非AAV辅助功能提供多核苷酸；

(B)在所述初始时间之后，通过向所述培养基中添加除Na⁺之外的一种或多种离子来改变所述培养基的离子强度；以及

(C)继续所述细胞的所述培养，从而产生比在没有步骤(B)的情况下获得的滴度更大的所述rAAV的生产滴度。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述添加的离子中的每种以足以使所述初始培养基中的这种离子的浓度增加约10mM至约80mM的含量提供。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的方法，其中生产滴度比在没有所述步骤(B)的情况下类似地进行细胞培养得到的滴度大至少50％。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述rAAV包括编码蛋白质的转基因盒，或包括转录核酸，其对基因或可遗传性疾病或病况具有治疗作用。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述rAAV属于rAAV1、rAAV2、rAAV5、rAAV6、rAAV7、rAAV8、rAAV9或rAAV10血清型或属于所述血清型的杂交型。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述rAAV属于rAAV2、rAAV5或rAAV9血清型或属于所述血清型的杂交型。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述添加的离子包括K⁺、Ca⁺⁺或Mg⁺⁺中的一种或多种。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述添加的离子包括CO₃^＝、HCO₃^–、HPO₄^–、PO₄^＝、SCN^–、SO₄^＝、HSO₄^–和Cl^–中的一种或多种。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述添加的离子包括乙酸盐、天冬氨酸盐、苯二甲酸氢盐、酒石酸氢盐、丁氧基乙氧基乙酸酯、辛酸盐、柠檬酸盐、脱氢乙酸盐、二乙酸盐、二羟基甘氨酸盐、d-糖酸盐、葡萄糖酸盐、谷氨酸盐、甘氨酸盐、糖硫酸盐、羟基甲烷磺酸盐、乳酸盐、甲硫氨酸盐、草酸盐、苯酚盐、苯酚磺酸盐、丙酸盐、丙酸盐、糖精、水杨酸盐、肌氨酸盐、山梨酸盐、巯基乙酸盐和对甲苯磺酸盐。

10.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述添加的离子包括K⁺和CO3^＝。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述细胞是人胚胎肾细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述细胞是HEK293细胞。

13.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述细胞是幼仓鼠肾细胞。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述细胞是BHK21细胞。

15.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述细胞是sf9昆虫细胞。