[发明专利]利用预测的洗脱缓冲液盐浓度的阳离子色谱

权利要求书

1.一种产生包括第一靶蛋白质(P1)和第二靶蛋白质(P2)的目标洗脱体积(238)的色谱方法，所述方法包括：

-提供(100)阳离子交换色谱柱(230)；

-在所述柱上施加(102)蛋白质溶液(202)，所述蛋白质溶液包含至少所述第一靶蛋白质(P1)和所述第二靶蛋白质(P2)以及任选地一种或多种另外的蛋白质(P3、P4、P5、P6)；

-将优化标准输入(106)色谱模拟软件(204)中，所述优化标准是所述目标洗脱体积相对于所述目标洗脱体积中所包含的所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质的期望性质；

-通过所述色谱模拟软件计算(108)适于从所述色谱柱洗脱所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质的洗脱缓冲液盐浓度(222)，使得能够获得与所述优化标准最佳匹配的目标洗脱体积，所述计算包括根据多个不同的洗脱缓冲液盐浓度来计算多个色谱模拟；

-通过所述色谱模拟软件根据至少计算出的盐浓度和输入的优化标准来计算(110)所述目标洗脱体积的汇集边界；

-在所述色谱柱上施加(112)具有所述计算出的盐浓度的洗脱缓冲液(226)；

-使用施加的洗脱缓冲液执行(114)所述洗脱；并且

-使用计算出的汇集边界收集(116)计算出的目标洗脱体积作为单独的级分。

2.根据权利要求1所述的色谱方法，所述优化标准选自包括以下各项的组：

a)所述目标洗脱体积中所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质的量的期望的比率或比率范围；

b)所述目标洗脱体积中所述第一靶蛋白质的期望的量或量范围与所述第二靶蛋白质的期望的量或量范围的组合；

c)所述第一靶蛋白质的期望的纯度或纯度范围与以下各项的组合：

·所述目标洗脱体积中第一蛋白质和第二蛋白质的量的期望的比率；

·所述目标洗脱体积中所述第二靶蛋白质的期望的量或量范围；

·所述目标洗脱体积中所述第二靶蛋白质的期望的纯度或纯度范围；

d)上述标准中的两个或更多个标准的组合。

3.根据前述权利要求中任一项所述的色谱方法，

其中施加的蛋白质溶液(202)包含所述一种或多种另外的蛋白质(P3、P4、P5、P6)。

4.根据前述权利要求中任一项所述的色谱方法，

-其中根据所述多个不同的洗脱缓冲液盐浓度并根据多个不同的洗脱缓冲液pH值来计算所述多个色谱模拟，所述方法进一步包括：

-其中所述计算(108)包括计算洗脱缓冲液盐浓度(222)和洗脱缓冲液pH值的组合，所述洗脱缓冲液盐浓度和所述洗脱缓冲液pH值的组合适于从所述色谱柱洗脱所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质，使得能够获得与所述优化标准最佳匹配的目标洗脱体积，其中执行所述色谱模拟以识别所述洗脱缓冲液盐浓度(222)和洗脱缓冲液pH的组合；

-其中根据至少所述洗脱缓冲液盐浓度和所述洗脱缓冲液pH值的计算出的组合以及所述输入的优化标准来计算所述目标洗脱体积的汇集边界；并且

-其中施加在所述柱上的所述洗脱缓冲液(226)具有计算出的盐浓度和计算出的pH值。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质是具有小于0.75和/或小于0.5的分辨率因数的蛋白质。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质是具有相同氨基酸序列的蛋白质的糖基化变体。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述第一靶蛋白质和所述第二靶蛋白质是具有相同氨基酸序列并且在FAB片段上包含不同数量的糖基基团的抗体单体。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述施加的蛋白质溶液包含各自浓度为至少0.5重量％、特别是至少1重量％、特别是至少2重量％的所述靶蛋白质(P1、P2)中的每种靶蛋白质和如果存在的所述另外的蛋白质(P3-P6)中的每种蛋白质。