[发明专利]脑类器官的生产方法

权利要求书

1.一种生产脑类器官的方法，所述方法包括：

i)培养体细胞；

ii)制备用于生产诱导性多能干细胞的无水凝胶的3D细胞培养板；

iii)通过在所述无水凝胶的3D细胞培养板中将培养的体细胞重编程为诱导性多能干细胞来生产诱导性多能干细胞；

iv)从步骤iii)的3D细胞培养板中分离所述诱导性多能干细胞；

v)制备未涂覆水凝胶的3D细胞培养板，用于形成脑类器官；和

vi)通过在无水凝胶的3D细胞培养板中培养分离的诱导性多能干细胞来形成脑类器官，

其中，所述3D细胞培养板包括：

孔板，所述孔板包括多个主孔和多个子孔，所述多个子孔形成在主孔的下部以注入细胞培养液并且包括在其底表面上的凹入部；和支持所述孔板的用于大容量和高速高内涵筛选(HCS)的连接件，并且

用于高内涵筛选(HCS)的连接件包括配备有固定装置以与所述孔板的下端连接并且从所述孔板的下端分离的底座以及位于所述孔板的上部以连接到所述底座的盖，

所述主孔具有形成为在预定位置逐渐变细的台阶，所述台阶相对于主孔的壁具有10°至60°的倾斜角(θ)。

2.权利要求1所述的方法，其中，所述脑类器官的形成包括：

在将诱导性多能干细胞制备成拟胚体后，

通过向聚集的诱导性多能干细胞中添加神经上皮诱导培养基来诱导神经上皮细胞；

通过向其中添加神经外胚层分化培养基来使神经上皮细胞分化成神经外胚层组织；

通过向神经外胚层组织添加神经上皮芽诱导培养基来增殖神经上皮芽；和

通过向增殖的神经上皮芽添加脑组织诱导培养基来形成脑组织。

3.权利要求1所述的方法，其中，所述水凝胶是基于胞外基质的水凝胶。

4.权利要求3所述的方法，其中，所述基于胞外基质的水凝胶是基底胶。

5.权利要求1所述的方法，其中，所述脑类器官的大小为0.8mm至1.3mm。

6.权利要求1所述的方法，其中，所述脑类器官的大小为1mm或更小。

7.权利要求1所述的方法，其中，所述子孔具有形成为朝向所述凹入部逐渐变细的倾斜表面，

所述子孔的上端直径为3.0mm至4.5mm，

所述凹入部的上端直径为0.45mm至1.5mm，

所述子孔和所述凹入部之间的倾斜表面(θ₂)为40°至50°，并且

所述子孔的直径与所述凹入部的直径的长度比为1:0.1至1:0.5。

8.权利要求1所述的方法，其中，所述主孔的个体体积为100μl至300μl，

所述凹入部的个体体积为20μl至50μl，并且

所述主孔与所述凹入部的个体体积比平均为1:0.1至1:0.5。

9.权利要求1所述的方法，其中，所述主孔包括所述台阶和所述子孔之间的空间部，

所述空间部的高度(a_h)平均为2.0mm至3.0mm，

所述子孔的高度(b_h)平均为1.0mm到2.0mm，并且

所述空间部与所述子孔的高度比(a_h:b_h)为1:0.3至1:1。