[发明专利]基于活性的探针

权利要求书

1.激活的泛素分子，其包含光交联剂部分代替泛素的31位的谷氨酰胺残基和/或32位的天冬氨酸残基。

2.根据权利要求1所述的激活的泛素分子，其中所述泛素是人泛素。

3.根据权利要求1或2任一项所述的激活的泛素分子，其中已经通过掺入非天然氨基酸，如对苯甲酰基-L-苯丙氨酸代替天冬氨酸/谷氨酰胺残基获得所述光交联剂部分。

4.根据前述权利要求任一项所述的激活的泛素分子，还包含报告标签。

5.根据权利要求4所述的激活的泛素分子，其中所述报告标签是生物素部分，或允许分析检测的其他报告子，例如表位标签、荧光团。

6.根据权利要求4或权利要求5所述的激活的泛素分子，其中所述生物素部分/报告标签通过附着到所述泛素的N-末端的接头分子共价附着到所述泛素分子。

7.缀合物分子，其包含与E2缀合酶缀合的根据任一前述权利要求所述的激活的分子。

8.根据权利要求7所述的缀合物分子，其中所述E2缀合酶是包含C85K或C87K突变和/或S22R或K92A突变的突变体酶。

9.根据权利要求7或8所述的缀合物分子，其中所述E2缀合酶是UBE2D3或UBE2N。

10.根据权利要求7-9中任一项所述的缀合物分子，其进一步包含N-末端His-标签基团，如六组氨酸标签。

11.根据权利要求7-10中任一项所述的缀合物分子在活性分析RING E3酶、RING E1酶和/或去泛素化酶的方法中的用途。

12.根据权利要求11所述的用途，其中活性分析是RING E3酶的活性分析。

13.根据权利要求12所述的用途，其用于(i)RING E3酶调节的研究，(ii)新的RING E3酶的发现，(iii)抑制剂筛选，(iv)抑制剂选择性分析；和/或(v)用于结构研究的酶中间体的稳定化。

14.检测权利要求7-10中任一项的缀合物分子与RING E3酶、RING E1酶和/或去泛素化酶之间相互作用的方法，所述方法包括使所述缀合物分子与所述RING E3酶、RING E1酶和/或去泛素化酶接触并检测任何新缀合物的形成。

15.权利要求14的方法，其中所述RING E3酶是RNF4、Cbl如c-Cbl、Praja2、TRIM11、HECT(11)、RBR(1)、RCR(1)TRAF6、TRAF2和HLTF的任一种或组合，并且去泛素化酶是DUBs(31)。

16.权利要求14或15所述的方法，其中相互作用是与RING E3酶的相互作用。