[发明专利]制造抗原特异性T淋巴细胞的方法

说明书

本发明涉及一种体外制造抗原特异性T淋巴细胞(CellTrAg)的新方法，该细胞用细胞内燃料标记并在载有抗原的单核细胞的存在下扩增，随后基于低强度的细胞内染料进行分类，其中低强度荧光是抗原特异性的标志，因为荧光损失与增殖强度相关。在功能测试中评估抗原特异性，该功能测试中基于低荧光而分选的抗原特异性淋巴细胞在分选过程中比具有高荧光的非特异性淋巴细胞更具活性；在调节性T淋巴细胞的情况下，活性被定义为抑制效应性淋巴细胞功能，而在效应性T淋巴细胞的情况下，活性被定义为增强这些细胞的特征，比如增殖、细胞因子和细胞毒性因子的产生。

本发明涉及制造抗原特异性T淋巴细胞(CellTrAg)的方法以用于其在免疫治疗中的临床用途。以这种方式产生的CellTrAg适用于治疗自身免疫性疾病，包括例如多发性硬化症、类风湿性关节炎、1型糖尿病，以及用于抑制不良免疫反应，如移植物排斥、过敏反应和移植物抗宿主病GVHD。

Treg淋巴细胞约占所有外周血淋巴细胞的1％，但对于维持其自身组织的耐受性很重要(Trzonkowski P 2009)(Vignali DA 2008)(Yi S 2012)。缺乏调节性T细胞会导致许多自身免疫性疾病和超敏反应，如X连锁免疫缺陷综合征、多内分泌病变和肠病变(IPEX)患者的情况所见(Gambineri E 2003)。Treg淋巴细胞可以被称为“智能类固醇(intelligent steroids)”，因为作为类固醇，它们抑制炎症反应并发挥免疫抑制作用，而相比之下，Treg细胞的生理抑制作用仅涉及病理反应(例如针对其自身组织的病理反应)。包括我们的观察结果在内的临床试验结果表明，Treg淋巴细胞治疗是安全的，不会损害针对外来危险抗原(病毒、细菌、癌细胞)的免疫反应(Marek-Trzonkowska N 2012)(Marek-Trzonkowska N 2014)(Martelli MF2014)(Bluestone JA 2015)。

我们的研究团队对Treg淋巴细胞的生物学和临床应用进行了10多年的研究。我们首次使用体外扩增的Treg细胞来治疗成人移植物抗宿主病(GvHD)(NKEBN/458-310/2008)(Trzonkowski P 2009)以及儿童1型糖尿病(T1D)(TregVAC ISRCTN06128462；TregVAC2.0EudraCT:2014-004319-35)(Marek-Trzonkowska N 2012)(Marek-TrzonkowskaN 2014)和多发性硬化症(TregSM EudraCT:2014-004320-22)(Trzonkowski P 2015)。目前，世界上的其他中心也进行了使用Treg细胞的临床试验，使用Treg细胞的临床试验涉及GVHD的治疗/预防(Di Ianni M 2011)、成人T1D治疗(NCT01210664)以及肾移植(NCT02091232和NCT02129881)和肝脏(ThRIL NCT02166177和NCT01624077)的耐受性的诱导。近年来，使用Treg淋巴细胞作为治疗工具的细胞疗法的动态开发已经开始。目前，世界上大约有40项临床试验使用这些细胞进行。所有这些项目都以一个目标为指导，即智能免疫抑制，这将抑制不需要的免疫反应而不损害生理免疫反应(Trzonkowski P 2015，Gliwiński M 2017)。