[发明专利]5’-肌苷酸二钠的分离方法

说明书

本发明提供一种从含有5’‑肌苷酸的微生物培养液中分离5’‑肌苷酸的方法。

技术领域

本发明涉及一种从微生物培养物中分离5’-肌苷酸二钠的方法。

背景技术

诸如肌苷酸二钠(disodium 5’-inosinate，IMP2Na)之类的嘌呤衍生物核苷酸在医药部门用作代谢紊乱的预防治疗剂、生长促进剂、抗癌剂等的原料，是在食品领域中用作调味品等食品添加剂的重要物质。肌苷酸二钠通过肌苷酸(inosinic acid，IMP)的鱼肉提取法、RNA酶分解法、微生物发酵法、发酵法和合成法的组合、RNA化学分解和合成的组合等来制备，所述肌苷酸为一种天然存在于肉类、鱼类等的物质。

肌苷酸为用于制备肌苷酸二钠的前体物质，对其制备方法进行了大量研究，为了获得可用作食品添加剂的优质5’-肌苷酸二钠，应该对肌苷酸进行纯化以去除杂质。

关于培养微生物并从其培养物生产5’-肌苷酸二钠的方法，在结晶化步骤中可以使用有机溶剂，但应该使用大量的有机溶剂，从而需要防爆设备和工人设备。另外，为了去除有机溶剂，可能会需要蒸馏工艺和相应的设备，从而需要一种替代方法。

发明内容

技术问题

本发明提供一种5’-肌苷酸二钠的分离方法，其包括：培养产生5’-肌苷酸的微生物；将所述微生物培养液的pH调节至7.4至8.0；将所述调节pH的培养液浓缩形成5’-肌苷酸二钠晶体；从所述含有5’-肌苷酸二钠晶体的所述培养液中分离5’-肌苷酸二钠晶体；以及将所分离的5’-肌苷酸二钠晶体与亲水性有机溶剂接触以洗涤所述晶体。

技术方案

如本文所用，“5’-肌苷酸(inosinic acid)”为核苷单磷酸酯，也称为次黄嘌呤核苷酸(inosine monophosphate，IMP)。“5’-肌苷酸”和“其盐”可互换使用。所述盐包括“5’-肌苷酸”或5’-肌苷酸二钠。

如本文所用，“培养物(culture)”是指通过培养微生物而获得的结果物。所述培养物可以包括微生物细胞或其代谢物。所述代谢物可以存在于细胞内或细胞外。所述代谢物可以为核酸代谢物。所述核酸代谢物可以为5’-肌苷酸或其盐。

如本文所用，“培养液(culture broth)”是指从培养物中除去微生物细胞的液体部分。所述培养液可以包括从微生物排出或衍生的产物。所述培养液可以包括可溶性产物。所述培养液可以包括5’-肌苷酸或其盐。

本发明的一方面提供一种5’-肌苷酸二钠的分离方法，其包括：培养产生5’-肌苷酸的微生物；将所述微生物培养液的pH调节至7.4至8.0；将所述调节pH的培养液浓缩形成5’-肌苷酸二钠晶体；从所述含有5’-肌苷酸二钠晶体的所述培养液中分离5’-肌苷酸二钠晶体；以及将所分离的5’-肌苷酸二钠晶体与亲水性有机溶剂接触以洗涤所述晶体。

所述方法可以包括从含有5’-肌苷酸的微生物培养物除去细胞体以获得培养液的步骤。

在所述获得培养液的步骤中，所述微生物可以为产生5’-肌苷酸的微生物。所述微生物可以为一种经过基因操作以增加5’-肌苷酸生产能力的微生物。所述微生物可以为细菌。所述微生物可以为革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。所述细菌可以为棒状杆菌(Corynebacterium)属或埃希氏菌(Escherichia)属。所述细菌可以为谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)、产氨短杆菌(C.ammoniagenes)或大肠杆菌(E.coli)。所述微生物可以将5’-肌苷酸分泌到细胞外。