[发明专利]视网膜色素变性的新治疗方法

说明书

分离的或纯化的反义寡聚体，其用于修饰CNOT3基因转录本或其部分中的mRNA前体剪接。

技术领域

本发明涉及反义寡聚体在用于治疗、预防或改善视网膜色素变性的影响中的用途。

背景技术

视网膜色素变性(RP)是由于视网膜中视杆细胞进行性变性而导致严重视力损害的退行性眼病；大多数RP病例是遗传的。这种形式的视网膜营养不良表现出与年龄无关的初始症状；因此，RP的诊断发生在从婴儿早期到成年晚期的任何时期。RP是一种罕见的疾病，大约4000人中就有一人(全世界超过150万人)受到影响。在家族性RP病例中，30％-40％表现为常染色体显性遗传(Hartong et al.2006)。目前尚无治疗RP的方法。

RP是由50多个基因的突变引起的。PRPF31基因的杂合突变导致常染色体显性视网膜色素变性(adRP)。在某些情况下，这种突变显示出不完全外显性，其中某些携带者发生视网膜变性，而其他携带者根本没有症状。无症状的携带者通过高于平均水平的未突变的PRPF31等位基因的表达而免受疾病的影响。

PRPF31基因的表达是由Ccr4-Not脱腺苷化酶(deadenylase)复合物控制的。Ccr4-Not是一个九亚基蛋白复合物，是真核细胞翻译和mRNA稳定性的主要调节因子。核心CCR4-Not复合物由酵母中的Ccr4p、Caf1p、五种Not蛋白(CNot1-CNot5)、Caf40p和Caf130p组成。

目前正在探索AAV介导的基因置换和CRISPR/Cas9基因编辑作为视网膜疾病的治疗方法。虽然PRPF31的编码序列在AAV载体的容量范围内，但PRPF31不受调控或过度表达的后果尚不清楚。此外，目前尚不清楚眼内病毒介导的基因治疗是否可以再次给药，因为已有报道称眼内病毒载体注射导致血清转换。此外，CRISPR/Cas9基因校正将需要每个家族的PRPF31突变的不同产物。此外，基因置换和基因编辑方法都需要在视网膜下注射病毒载体以实现充分的转染。

有必要为视网膜色素变性提供新的治疗或预防措施；或者至少提供方法来补充先前已知的治疗方法。

本发明寻求提供一种用于治疗、预防或改善视网膜色素变性影响的改进或替代方法。

先前对背景技术的讨论仅旨在帮助理解本发明。该讨论不是承认或承认所提及的任何材料是或属于本申请优先权日时的公知常识的一部分。

发明概述

广义地，根据本发明的一个方面，提供了分离或纯化的反义寡聚体，其用于修饰CNOT3基因转录本或其部分中的mRNA前体(pre-mRNA)剪接。优选地，提供了分离或纯化的反义寡聚体，其用于诱导CNOT3基因转录本或其部分中的非生产性剪接。

例如，在本发明的一个方面，提供了10至50个核苷酸的反义寡聚体，其包含与CNOT3基因转录本或其部分的内含子附近或内含子内的区域互补的靶向序列。在本发明的另一方面，提供了10至50个核苷酸的反义寡聚体，其包含与CNOT3基因转录本或其部分的外显子附近或外显子内的区域互补的靶向序列。

优选地，所述反义寡聚体是磷酰二胺吗啉代寡聚体。优选反义寡聚体具有修饰的主链。

优选地，所述反义寡聚体选自表1所示的序列。

优选地，所述反义寡聚体选自包含以下序列的列表：SEQ ID NO:1-74，更优选SEQID NO:4、7、9、11、14、16-18、27、30、34、35、64和67，甚至更优选SEQ ID NO:4、7、27、30、34和64。

所述反义寡聚体优选地用于诱导CNOT3基因转录本的一个或多个外显子或其部分的跳跃。例如，反义寡聚体可诱导外显子3、8、9、12和/或17的跳跃。