[发明专利]分离生物分子的方法

说明书

本公开涉及用于从细胞培养物或从生物溶液分离生物分子的方法，包括以下步骤：(a)提供包含能够结合所述生物分子的配体的磁性颗粒；(b)使包含所述生物分子的细胞培养物或生物溶液与所述磁性颗粒接触，以获得包含所述结合的生物分子的磁性颗粒；(c)用磁场将所述磁性颗粒保持在磁性分离器中；(d)任选地用洗涤液洗涤所述磁性颗粒；(e1)提供洗脱液的流通过所述磁性分离器，以从所述磁性颗粒洗脱所述结合的生物分子，同时用所述磁场将所述磁性颗粒保持在所述磁性分离器中；(f1)将从所述磁性分离器洗脱的所述生物分子运送到膜色谱法装置；(g1)通过膜色谱法将所述生物分子与杂质和/或污染物分离。

技术领域

本公开涉及分离生物分子的领域，并且特别涉及在磁性分离器中用于从细胞培养物或从生物溶液分离生物分子的方法。

背景技术

通过使用磁性吸附珠分离生物分子是本领域已知的。例如，美国专利US7506765B2描述了用于从悬浮液中选择性分离磁性颗粒的高梯度磁性分离器，该悬浮液通过布置在磁场中的磁性材料的板状分离结构的基质进行。此外，美国专利US6602422 B1涉及用于在微量分离柱上纯化生物材料的分离和释放方法，其通过引用以其整体并入本文。该方法包括从磁性载体释放生物材料，并从微量分离柱洗脱，同时磁性载体仍被微量分离柱内部的铁磁性颗粒基质磁性地保持。专利公开WO2018122246描述了用于从细胞培养物分离生物分子的方法，包括将生物分子结合到磁性珠，通过使用磁性分离器将包括结合的生物分子的磁性珠与细胞培养物的其余部分分离，将包括结合的生物分子的磁性珠作为具有加入的缓冲液的浆料运送到单独的洗脱单元，并且在洗脱单元中从磁性珠洗脱生物分子。此外，专利公开WO2018122089涉及包含多孔基质和嵌入所述基质中的一个或多个磁性颗粒的磁性珠，并且进一步包含共价偶联到多孔基质的免疫球蛋白结合配体。

磁性珠加工是直接从粗进料单元储备中纯化目标生物分子的有效方式，并且该技术可以替代澄清工具，例如离心、过滤和捕获色谱法。磁性珠用对目标生物分子具有亲和力的配体官能化。加入磁性珠并与粗进料混合一定时间以特异性结合进料中的所有目标生物分子。结合后，磁性珠被磁体捕获，同时将细胞和杂质倾析掉。将洗涤缓冲液加入到磁性珠中，并关闭磁体，并进行洗涤缓冲液与磁性珠的混合。混合后，打开磁体以捕获珠，并将洗涤缓冲液倾析掉。在几次洗涤后，以与洗涤缓冲液相同的方式将洗脱缓冲液加入磁性珠中，并使用几个分批洗脱步骤从磁性珠释放目标生物分子。所有洗涤步骤和洗脱步骤都以分批模式进行，并且由于需要进行几个分批洗脱步骤以获得高洗脱产率，与柱色谱法相比，使用该技术将更稀释目标物。此外，使用分批洗脱更难以优化洗脱条件，因为洗脱缓冲液需要滴定洗涤缓冲液以达到正确的洗脱条件以从磁性珠释放目标生物分子，并且对于每个洗脱步骤需要不同或大体积的洗脱缓冲液。克服这一点的一种方式是将经洗涤的珠转移到色谱柱中用于洗脱步骤，以减少洗脱缓冲液的体积，并使用用一种优化的洗脱缓冲液分级来收集洗脱合并物。然而，这需要另外的设备和柱填料，这是耗时的。

因此，本领域需要用于分离生物分子的改进的方法，包括从粗进料有效捕获和纯化生物分子，同时实现减少的方法时间和更成本有效的方法。

发明内容

本公开实现了提供用于分离生物分子的改进的方法的上述目的，本公开涉及通过在磁性分离器中同时施加流动洗脱和搅动来分离生物分子的方法。如本文所示，从而可以通过使用小的洗脱体积以令人惊讶的高产率和纯度直接从磁性分离器中流动洗脱目标生物分子。该方法的精度等于柱色谱法的精度，同时需要显著更短的方法时间。

更具体地，本公开涉及用于从细胞培养物或从生物溶液分离生物分子的方法，包括以下步骤：

(a)提供包含能够结合所述生物分子的配体的磁性颗粒；

(b)使包含所述生物分子的细胞培养物或生物溶液与所述磁性颗粒接触，以获得包含所述结合的生物分子的磁性颗粒；

(c)用磁场将所述磁性颗粒保持在磁性分离器中；

(d)任选地用洗涤液洗涤所述磁性颗粒；