[发明专利]用于从乙酰-CoA生产异丁烯的改进手段和方法

权利要求书

1.一种重组生物体或微生物，其能够将乙酰-CoA酶促转化成异丁烯，

(A)其中在所述生物体或微生物中：

(i)将乙酰-CoA酶促转化成乙酰乙酰-CoA，

(ii)将乙酰乙酰-CoA酶促转化成3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA，

(iii)将3-羟基-3-甲基戊二酰-CoA酶促转化成3-甲基戊烯二酰-CoA，

(iv)将3-甲基戊烯二酰-CoA酶促转化成3-甲基巴豆酰-CoA，和

(v)其中通过以下方式将所述3-甲基巴豆酰基-CoA转化成异丁烯：

(a)将3-甲基巴豆酰基-CoA酶促转化成3-甲基巴豆酸，然后将其进一步酶促转化成所述异丁烯；或

(b)将3-甲基巴豆酰-CoA酶促转化成3-羟基-3-甲基丁酰-CoA，然后将其进一步酶促转化成3-羟基-3-甲基丁酸，然后将其进一步酶促转化成3-膦氧基-3-甲基丁酸，然后将其进一步酶促转化成所述异丁烯；

(B)其中所述重组生物体或微生物具有增加的超过其衍生自的生物体或微生物的辅酶A(CoA)池，这是由于：

(i)增加的泛酸摄取；和/或

(ii)增加的泛酸向CoA的转化。

2.权利要求1的重组生物体或微生物，其中所述的(B)(i)增加的泛酸摄取是由于泛酸摄取转运子的重组表达。

3.权利要求1或2的重组生物体或微生物，其中所述增加的泛酸向CoA的转化是由于以下(i)至(v)的至少一个的重组表达：

(i)催化泛酸酶促转化成4’-磷酸泛酸的酶，优选泛酸激酶；

(ii)催化4’-磷酸泛酸和L-半胱氨酸酶促转化成4’-磷酸泛酰-L-半胱氨酸的酶，优选磷酸泛酰半胱氨酸合成酶；

(iii)催化4’-磷酸泛酰-L-半胱氨酸酶促转化成泛酰巯基乙胺-4-磷酸的酶，优选4’-磷酸泛酰半胱氨酸脱羧酶；

(iv)酶催化泛酰巯基乙胺-4-磷酸酶促转化成脱磷-CoA的酶，优选泛酰巯基乙胺-磷酸腺苷酰转移酶；和

(v)催化脱磷-CoA酶促转化成CoA的酶，优选脱磷-CoA激酶。

4.权利要求1至3任一项的重组生物体或微生物，其中所述生物体或微生物进一步通过以下来表征：

a)具有磷酸转酮酶活性；

b)(i)通过失活编码磷酸果糖激酶的基因或通过与未修饰的微生物相比降低磷酸果糖激酶活性而具有减少的或失活的Embden-Meyerhof-Parnas途径(EMPP)；或

(ii)不具有磷酸果糖激酶活性

和

c)(i)通过失活编码葡萄糖-6-磷酸脱氢酶或通过与非修饰的微生物相比降低葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性而具有减少的或失活的戊糖磷酸途径(PPP)的氧化分支；或

(ii)不具有葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性。

5.权利要求4的重组生物体或微生物，进一步通过以下来表征：

d)具有果糖-1,6-二磷酸磷酸酶.

6.权利要求4或5的重组生物体或微生物，其中通过失活编码甘油醛3-磷酸脱氢酶的基因或通过与未修饰的微生物相比降低甘油醛3-磷酸脱氢酶活性，EMPP被进一步降低或失活。

7.权利要求4至6任一项的重组生物体或微生物，其已经经遗传修饰以具有增加的磷酸转酮酶活性。

8.权利要求4至7任一项的重组生物体或微生物，其中所述微生物是真菌。

9.权利要求4至7任一项的重组生物体或微生物，其中所述微生物是细菌。

10.权利要求9的重组生物体或微生物，其中编码PEP-依赖性PTS转运子的基因已经被失活。

11.如权利要求1至10任一项中限定的重组生物体或微生物用于生产异丁烯的用途。