[发明专利]促进多能干细胞的胸腺上皮细胞和胸腺上皮细胞祖细胞的分化的方法在审
| 申请号： | 202080021893.1 | 申请日： | 2020-03-31 |
| 公开（公告）号： | CN113646423A | 公开（公告）日： | 2021-11-12 |
| 发明（设计）人： | R·格拉斯佩纳;M·赛克斯;N·丹兹尔;M·科斯拉维-马哈洛伊 | 申请（专利权）人： | 纽约市哥伦比亚大学理事会 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 北京市铸成律师事务所 11313 | 代理人： | 王珺;段丹辉 |
| 地址： | 美国*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 促进 多能 干细胞 胸腺 上皮细胞 细胞 分化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种诱导多能干细胞分化成胸腺上皮细胞或胸腺上皮细胞祖细胞的方法，其包括以下步骤：
a.使所述多能干细胞分化成定形内胚层细胞；
b.培养所述定形内胚层细胞，并且通过如下方法使所述定形内胚层细胞分化成前部前肠细胞：将所述定形内胚层细胞与抑制BMP的剂和抑制TGFβ信号传导的剂接触或一起孵育，并且进一步将所述定形内胚层细胞与刺激HOXA3表达的剂和刺激TBX1表达的剂接触或一起孵育；
c.培养所述前部前肠细胞，并且通过如下方法使所述前部前肠细胞分化成咽内胚层细胞：将所述前部前肠细胞与刺激HOXA3表达的剂、刺激TBX1表达的剂以及刺激PAX9和PAX1表达的剂接触或一起孵育；
d.培养所述咽内胚层细胞，并且通过如下方法使所述咽内胚层细胞分化成远端咽囊(PP)特化细胞、胸腺上皮细胞或胸腺上皮祖细胞：将所述咽内胚层细胞与抑制BMP的剂接触或一起孵育；以及
e.培养来自步骤c或步骤d的所述咽内胚层细胞，并且通过如下方法使所述咽内胚层细胞分化成远端咽囊(PP)特化细胞、胸腺上皮细胞或胸腺上皮祖细胞：将所述咽内胚层细胞与BMP接触或一起孵育。
2.如权利要求1所述的方法，其中步骤a被执行约一天至约六天。
3.如权利要求1所述的方法，其中在步骤a.中，将所述多能干细胞在无血清分化培养基中培养，并且与约0.5ng/ml的量的人骨形态发生蛋白(BMP)、约2.5ng/ml的量的人碱性成纤维细胞生长因子和约100ng/ml的量的人活化素A接触或一起孵育。
4.如权利要求1所述的方法，其中步骤b.在约第3天至约第5天开始执行，持续约2天至约3天。
5.如权利要求1所述的方法，其中在步骤b.中，所述抑制BMP的剂选自由头蛋白和多索莫芬组成的组，所述抑制TGFβ信号传导的剂是SB431542，所述刺激HOXA3表达的剂是视黄酸，并且所述刺激TBX1表达的剂是FGF8b。
6.如权利要求1所述的方法，其中步骤c.在约第5天至约第8天开始执行，持续约6天至约10天。
7.如权利要求1所述的方法，其中在步骤c.中，所述刺激HOXA3表达的剂是视黄酸，所述刺激TBX1表达的剂是FGF8b，并且所述刺激PAX9和PAX1表达的剂是音猬因子(Shh)。
8.如权利要求7所述的方法，其中在步骤c.中，在约24小时时，FGF8b以约50ng/ml的量使用并且视黄酸以约0.25μM的量使用，并且在48小时时，FGF8b以约50ng/mL的量使用并且Shh以约100ng/ml的量使用。
9.如权利要求1所述的方法，其中步骤d.在约第12天至约第18天开始执行，持续约4天至约7天。
10.如权利要求1所述的方法，其中在步骤d.中，所述抑制BMP的剂选自由头蛋白和多索莫芬组成的组。
11.如权利要求1所述的方法，其中步骤e.在约第19天至约第25天开始执行，持续约5天至约15天。
12.如权利要求1所述的方法，其中在步骤e.中，BMP以约50ng/ml的量使用。
13.如权利要求1所述的方法，其进一步包括将所述方法结束时的所述TEC或TEP与存活素抑制剂接触或一起孵育的步骤。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述存活素抑制剂是YM155。
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