[发明专利]肽沉淀方法

说明书

提供了合成肽的方法。该方法包括促进肽过滤的特定沉淀步骤。

提供了合成肽的方法。该方法包括促进肽过滤的特定沉淀步骤。

肽，无论是在溶液中或在固相上，通常都是通过一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合从C到N末端合成。然而，合成肽的肽和氨基酸倾向于具有反应性侧链官能团。因此，在合成肽时，重要的是确保相应的氨基选择性地与羧基反应，而不会在此类侧链官能团上发生任何副反应，因为从实用的角度来看这可能会严重损害收率或甚至会破坏被合成的产物。为了最小化此类副反应，因此常规做法是适当地掩蔽反应物的反应性侧基和末端以帮助确保所需的反应发生。

由于相应的氨基保护基(临时保护基)在合成期间被多次去除，因此它们的去除必须在温和的条件下进行。同时，氨基酸和肽反应物的反应性侧链基团，包括树脂结合的肽材料以及要加到生长链中的额外材料，通常在整个合成过程中都被侧链保护基掩盖(永久性保护基)并且仅在合成过程的最后一步被去除。

众所周知的临时保护基是叔丁氧基羰基(Boc)和9-芴甲氧基羰基(Fmoc)，它们可以被弱酸或弱碱裂解。

然而，任选地在清除剂和溶剂存在的情况下，永久性保护基的裂解以及从树脂的裂解通常受强酸或强碱的影响。在裂解后，必须从裂解溶液中回收肽。

回收肽的典型方法包括使用酸/盐化学。例如，肽可以在盐水溶液(例如氯化钠)中沉淀，并且然后可以收集固体(例如，通过真空过滤)、洗涤和干燥固体。然而，这些方法存在商业规模生产的问题，包括高杂质水平。其他回收方法包括通过加入溶剂例如特别是醚溶剂来沉淀肽，然后通过过滤收集沉淀的肽。

然而，用醚溶剂沉淀通常会导致肽沉淀物堵塞过滤装置(例如，当沉淀物太细时)和/或发粘/粘稠，并且因此也会使过滤复杂化或甚至阻止过滤(例如，当沉淀物是胶状时)。

因此，对于肽的大规模生产，此类问题会极大地影响肽合成方案的可行性。因此，持续需要能够以大批量生产具有商业价值的肽材料的肽合成方法。在合成后回收肽材料，例如通过沉淀和后续的过滤，是其中需要进一步改进的合成的一个方面，因为常规方法通常仍然需要大量的过滤时间，这继而显著影响生产成本。

现已令人惊奇地发现，根据本发明的方法制备的肽沉淀物可以比根据本领域标准方法沉淀的肽沉淀物过滤得快得多。因此，根据本发明的方法可以有利地用于提供用于合成和回收肽的改进的商业规模方法。

因此，在第一个实施方式中，本发明涉及一种获得完全脱保护的肽的方法，所述方法包括以下连续步骤：

a.)合成具有至少一个酸不稳定保护基的肽中间体

b.)使用包含酸和任选的清除剂和/或非质子溶剂的裂解试剂去除所述保护基以形成裂解的肽溶液(I)，然后

c.)向裂解的肽溶液(I)提供溶剂以形成裂解的肽溶液(II)，所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷或式(I)的酯溶剂

其中R¹和R²彼此独立地为直链或支链C₁-C₁₀烷基或C₃-C₆环烷基，然后

d.)以足以从裂解的肽溶液(II)中沉淀肽的量提供沉淀剂，所述沉淀剂选自至少一种醚溶剂和至少一种烃溶剂及其混合物，以及

e.)收集肽。

另一方面，本发明提供了一种用于沉淀肽的方法，所述方法包括以下连续步骤：(a)提供基本上由具有至少一个酸不稳定保护基的肽中间体和由酸和任选的清除剂和/或溶剂构成的裂解试剂组成的组合物，然后(b)向组合物提供溶剂以获得裂解的肽溶液(II)，所述溶剂选自氯仿、二氯甲烷或如上定义的式(I)的酯溶剂，然后(c)向裂解的肽溶液(II)提供沉淀剂，所述沉淀剂选自醚溶剂和烃溶剂及其混合物，然后d.)收集肽。