[发明专利]一种索马鲁肽的纯化方法

说明书

本发明涉及一种索马鲁肽的纯化方法。本发明将索马鲁肽水溶液加热去除保护基团；将索马鲁肽水溶液经过聚合物填料进行一次纯化，以碳酸氢铵为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集主峰样品；再将收集的样品经过八烷基硅烷键合硅胶进行二次纯化，以磷酸二氢铵溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集主峰样品；最后将收集的样品经过八烷基硅烷键合硅胶进行转盐，用醋酸铵水溶液为A相，乙腈为B相进行等度洗脱；后用40～50mg/L氢氧化钠水溶液为A相，加入15～25％A相的乙腈为B相进行梯度洗脱，收集主峰样品，浓缩冻干后得到索马鲁肽成品。本发明的纯化方法，既能够达到较高的纯度，成品纯度达到99％，单杂小于0.2％，同时，成品溶解性好，样品回收率能够达到100％。

技术领域

本发明涉及医药化工技术领域，尤其涉及一种索马鲁肽的纯化方法。

背景技术

索马鲁肽是一种新型的每周皮下注射一次的GLP-1类似物。索马鲁肽是由诺和诺德公司研发的每周一次注射的长效GLP-1类似物。索马鲁肽是经过短链的PEG修饰，亲水性大大增强。PEG修饰后不但可以与白蛋白紧密结合，掩盖DPP-4酶水解位点，还能降低肾排泄，可延长生物半衰期，达到长循环的效果。2017年12月，FDA正式批准诺和诺德研发的一周一次GLP-1降糖药索马鲁肽上市。

固相合成索马鲁肽的粗产物中存在多种影响样品纯度和收率的杂质，目前对于索马鲁肽纯化的研究已经较多，纯度也能够达到99％以上的水平，但是现有的纯化方法得到的成品溶解性不好，在后续的研究和应用过程中还需要采用其他手段来改善成品溶解性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种索马鲁肽的纯化方法，既能够达到较高的纯度，成品纯度达到99％，单杂小于0.2％，同时，成品溶解性好，样品回收率能够达到100％。

本发明的第一个目的是提供了一种索马鲁肽的纯化方法，包括如下步骤：

S1、溶解：将索马鲁肽粗肽溶解在乙腈水溶液中得到索马鲁肽水溶液，加热去除保护基团；

S2、一次纯化：将S1步骤的索马鲁肽水溶液以聚合物填料为固定相的色谱柱，以碳酸氢铵为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集主峰样品；

S3、二次纯化：将S2步骤收集的样品以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，以磷酸二氢铵溶液为A相，乙腈为B相，进行梯度洗脱，收集主峰样品；

S4、转盐：将S3步骤收集的样品以八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，一阶段用醋酸铵水溶液为A相，乙腈为B相进行等度洗脱；二阶段用40～50mg/L氢氧化钠水溶液为A相，加入15～25％A相的乙腈为B相进行梯度洗脱，收集主峰样品，浓缩冻干后得到索马鲁肽成品。

进一步地，S1步骤中，索马鲁肽水溶液中索马鲁肽的浓度为4～6mmol/L。

进一步地，S1步骤中，加热是在40～45℃加热1.5～2小时。

申请人发现，由于索马鲁肽本身结构组成的特征，在合成裂解过程中，色氨酸的保护基团容易脱除不完全，在分析仪器上会出现双峰的情况，对纯化收率有很大的影响，经申请人反复摸索，当粗肽完全溶解后，水浴40-45℃恒温加热1.5-2小时，效果最佳，可将保护基团完全去除。温度过低达不到完全去除的目的，温度过高则粗肽溶液稳定性变差。

进一步地，S2步骤中，所述的聚合物填料的规格为10μm、

进一步地，S2步骤中，所述的碳酸氢铵采用磷酸调节pH至7.0～7.5。

进一步地，S2步骤中，B相的洗脱梯度为25％-40％，洗脱时间为40～60min。

申请人对不同流动相体系进行分析对比，发现碳酸氢铵用磷酸调pH至7.0-7.5对于杂质分离效果明显，在此条件下，不仅洗脱能力强，且能很好的分离主峰前杂及主峰前后一些稍远杂质，为下一步纯化提高了收率。