[发明专利]一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用，所述方法包括(1)将样品进行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液；(2)采用液相色谱串联质谱对水解液进行检测；(3)以式(I)所述化合物的质谱信号峰面积对糖胺聚糖羧酸化衍生物标准品的量做标准曲线，根据标准曲线计算样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量。本发明所涉及的方法通过对糖胺聚糖羧酸化衍生物进行水解，可以稳定得到特定结构的水解产物，该结构可以通过MS检测到并选择其中具有较高质谱丰度的水解产物，因此可以间接计算糖胺聚糖羧酸化衍生物的量。且该检测方法的专属性强、准确度高、精密度好、定量限低、检测限低。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用，尤其涉及一种专属性强、准确度高、精密度好、定量限低、检测限低的用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用。

背景技术

现有技术例如CN105744940A和CN111670038A两篇专利公开报道了糖胺聚糖羧酸化衍生物作为药物具有抗肿瘤及抗肿瘤转移活性，具有广泛的应用前景。糖胺聚糖羧酸化衍生物为未分级肝素(UFH)经过两步氧化反应后得到的含有糖醛酸邻二醇结构氧化开环的双羧酸衍生物，其属于肝素衍生物，是一种链状、结构不均一的粘多糖物质。在药物代谢研究中，需要测定生物样品中药物的含量以评价该药物的药物代谢动力学性质。在生物样品中直接检测完整的结构不容易实现，而且由于生物样品中存在多种内源性物质，例如蛋白、磷脂等，常规的多糖测试方法易受到内源性物质的干扰而无法对糖胺聚糖羧酸化衍生物进行定量测定。因此，如何提供一种准确的糖胺聚糖羧酸化衍生物的检测方法，成为了亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用，尤其提供一种专属性强、准确度高、精密度好、定量限低、检测限低的用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将含糖胺聚糖羧酸化衍生物的样品进行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液：

其中，各R^a独立地为-SO₃H或-H，各R^b独立地为H、-SO₃H或-C(O)CH₃，各R^c独立地为-SO₃H或-H，n为0、1、2、3、4或5；

(2)采用液相色谱串联质谱对步骤(1)得到的水解液进行检测；

(3)根据质谱信号峰面积对糖胺聚糖羧酸化衍生物标准品的量做的标准曲线计算样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物包含式(II)所示的结构单元和任选的式(III)所示的结构单元：

其中，各R^a独立地为-SO₃H或-H，R^b独立地为H、-SO₃H或-C(O)CH₃，R^c独立地为-SO₃H或-H。

优选地，所述式(I)所示化合物具有以下结构式中至少一种的结构：

其中，化合物(a)的质谱信号为MS(ESI,neg.ion)m/z:432.0[M-H]^-；