[发明专利]一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其应用

权利要求书

1.一种用于检测样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将含糖胺聚糖羧酸化衍生物的样品进行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液：

其中，各R^a独立地为-SO₃H或-H，各R^b独立地为H、-SO₃H或-C(O)CH₃，各R^c独立地为-SO₃H或-H，n为0、1、2、3、4或5；

(2)采用液相色谱串联质谱对步骤(1)得到的水解液进行检测；

(3)根据质谱信号峰面积对糖胺聚糖羧酸化衍生物标准品的量做的标准曲线计算样品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物包含式(II)所示的结构单元和任选的式(III)所示的结构单元：

其中，各R^a独立地为-SO₃H或-H，R^b独立地为H、-SO₃H或-C(O)CH₃，R^c独立地为-SO₃H或-H。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述式(I)所示化合物具有以下结构式中至少一种的结构：

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述糖胺聚糖羧酸化衍生物的重均分子量为3000-20000Da，优选7000-14000Da，进一步优选8000-13500Da；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物的开环度为10-100％，优选25-80％，进一步优选25-60％。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述将含糖胺聚糖羧酸化衍生物的样品进行水解的处理方式为加热；

优选地，所述加热的温度为70-100℃，优选85-95℃；

优选地，所述加热的时间为12-168h，优选12-120h；

优选地，所述标准曲线的制作方法为：以糖胺聚糖羧酸化衍生物作为标准品，按照步骤(1)的方法水解其不同梯度浓度的溶液，按照步骤(2)的方法检测不同浓度标准品溶液的水解液中式(I)所示化合物的质谱信号峰面积，以质谱信号峰面积对糖胺聚糖羧酸化衍生物标准品的量做标准曲线。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱为反相色谱、尺寸排阻色谱或亲水色谱；

优选地，所述液相色谱的流动相为流动相A和流动相B；所述流动相A为六氟异丙醇和戊胺的水溶液；所述流动相B为六氟异丙醇和戊胺的乙腈-水溶液；

优选地，所述流动相A为含有45-55mM六氟异丙醇和13-17mM戊胺的水溶液；所述流动相B为含有45-55mM六氟异丙醇和13-17mM戊胺的乙腈-水溶液；所述流动相B中乙腈与水的体积比为70:30-80:20；

优选地，所述液相色谱的流动相为流动相A和流动相B，具体如下表所示。

流动相A	2O]]>
流动相B	2O(75/25,v/v)]]>