[发明专利]一种乌头A病毒的RT-PCR检测引物及方法

说明书

本申请涉及一种乌头A病毒的RT‑PCR检测引物及方法。具体而言，本发明人在毛茛科植物上鉴定到一种香石竹潜隐病毒属的新病原体，该病原体是首次报道。由于没有针对该病原体的检测方法，本申请根据病原体的全基因组序列设计了特异性检测引物/探针，建立了检测该病原体的方法，扩展了名贵中药材(如毛茛科植物乌头)病毒感染相关疾病的检测范围。

技术领域

本申请属于植物病害诊断领域，涉及一种检测毛茛科植物病原体的方法。

背景技术

乌头(Aconitum sp.)是毛茛科(Ranunculaceae)植物，多年生至一年生草本。附子是乌头子根的加工品，是我国传统名贵中药材。

乌头约有350种，分布于北半球温带，主要分布于亚洲，其次在欧洲和北美洲。我国约有167种，各省区都有分布，大多数分布于云南北部、四川西部和西藏东部的高山地带。在我国本属的种类中约有36种可供药用，中药中的草乌、关白附等都是本属植物，块根有镇痉、镇痛、祛风湿和解热等作用(中国植物志，第27卷，毛茛科、翠雀族、乌头属Aconitum)。

自1986年，我国便有乌头花叶病的报道，通过电子显微镜观察，确定病原体为一种720×13nm至780×13nm的线性病毒。近期，通过RT-PCR的方法在江油附子上鉴定到黄瓜花叶病毒(CMV)，CMV的病毒粒子是二十一面体球形。因此，造成乌头花叶病的线性病毒种类还未确定。

RT-PCR是目前最常使用的病毒检测方法之一，是一种核酸水平的检测方法。对于生物学检测、电子显微镜检测、血清学检测等检测方法具有多方面优点：灵敏度高，能够将极微量的核酸快速扩增至可检测水平，灵敏度可达pg级；特异性强：不受相体内杂蛋白的影响；(3)快速。本申请针对乌头属植物上的一种新病毒设计了特异性检测引物/探针，为检测提供了有效的工具。

发明内容

根据一些实施方案，提供了一种分离的生物体。在一些实施方案中，所述分离的生物体是新的，是目前尚未报道过的新物种。

在本申请的上下文中，所述分离的生物体是经过分离的，而非存在于自然界中的状态。

在具体的实施方案中，提供了一种分离的生物体。所述的生物体是微生物。

在具体的实施方案中，提供了一种分离的生物体，所述的生物体是病毒；优选RNA病毒。

在具体的实施方案中，提供了一种分离的生物体，根据ICTV对香石竹潜隐病毒属新种认定的规定，所述的生物体属于香石竹潜隐病毒属Carlavirus。

在具体的实施方案中，提供了一种分离的生物体，所述的生物体在上下文中被称为乌头A病毒。

在具体的实施方案中，提供了一种分离的生物体，所述的生物体包含选自以下的核苷酸(任一项或组合)：

-SEQ ID No.7所示的核苷酸或其片段；

-互补于SEQ ID No.7所示核苷酸的核苷酸；或

-与SEQ ID No.7所示核苷酸具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的核苷酸。

其中，SEQ ID No.7所示的核苷酸是所述生物体的遗传物质；例如基因组核苷酸(如RNA)。

根据一些实施方案，提供了一种分离的核苷酸，其是选自以下的核苷酸：

SEQ ID No.1所示的核苷酸或其片段；

互补于SEQ ID No.1所示核苷酸的核苷酸；

与SEQ ID No.1所示核苷酸具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％同一性的核苷酸；