[发明专利]一种高效构建细胞文库的电击转化方法在审
| 申请号： | 202011601166.0 | 申请日： | 2020-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN113122578A | 公开（公告）日： | 2021-07-16 |
| 发明（设计）人： | 金鸣;袁鹏飞;刘娜;苏美华 | 申请（专利权）人： | 博雅缉因（北京）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/864;C12N15/87;C12N15/55;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京彩和律师事务所 11688 | 代理人： | 张红春 |
| 地址： | 102206 北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 构建 细胞 文库 电击 转化 方法 | ||
1.一种高效构建细胞文库的方法，包括：
1)构建sgRNA表达细胞；和
2)将Cas9 mRNA通过电击转化导入所述sgRNA表达细胞中。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)中，通过病毒侵染方式构建sgRNA表达细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染复数不超过0.3。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染复数为0.1-0.3。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中所述病毒为AVV病毒或慢病毒。
6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中所述Cas9 mRNA与所述sgRNA表达细胞的比值为约1X106-1X107个细胞每1μg-120μg Cas9 mRNA，优选为约1X106-1X107个细胞每2μg-100μg Cas9 mRNA。
7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中当所述电击转化的细胞数为约1X106时，所述电击转化的电压为200-400V，时长为1ms，脉冲数为1个。
8.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中当所述电击转化的细胞数为约1X107时，所述电击转化的电压为400-700V，时长为1ms，脉冲数为2个。
9.根据权利要求7所述的方法，所述电击转化的电压为250-400V、300-400V、250-350V、250-300V或200-300V。
10.根据权利要求8所述的方法，所述电击转化的电压为400-650V、400-600V、400-550V、400-500V、400-450V、450-700V、500-700V、550-700V或600-700V。
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