[发明专利]一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂

说明书

本发明提供了一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，由冷冻基础液、荷叶提取物和绞股蓝多糖组成。本发明通过添加荷叶提取物和绞股蓝多糖提高对异齿裂腹鱼精液的保护，减少冷冻过程中的活性氧对精子的损伤。

技术领域

本发明涉及鱼类养殖技术领域，尤其是涉及一种野生异齿裂腹鱼 精液冷冻保护剂。

背景技术

异齿裂腹鱼隶属于鲤形目,鲤科,裂腹鱼亚科,裂腹鱼属,俗称欧氏 弓鱼,副裂腹鱼,异齿弓鱼,地方名为棒棒鱼,是一种我国特有的高原冷 水性鱼种,分布于雅鲁藏布江中上游干支流及附属水体中。为了保护 野生异齿裂腹鱼，一方面是开展异齿裂腹鱼的养殖业，另一方面是需 要对野生异齿裂腹鱼进行保护，而对异齿裂腹鱼精液冷冻保存，不但 可以提高异齿裂腹鱼人工繁殖过程中的受精率，而且还有利于异齿裂 腹鱼的种质资源的保护。

相关研究表明，精液在冷冻平衡过程中，不可避免的通过呼吸代 谢产生大量的活性氧(ROS),其所携带的氧自由基(O^2-、H₂O₂和-OH) 能使精子细胞膜的不饱和脂肪酸发生氧化，造成精子细胞膜损伤，最 终导致猪精子受精能力急剧下降。因此，在冷冻液中加入抗氧化成分 可以起到一定的保护作用。

荷叶提取物中主要含有黄酮类、生物碱类和鞣质类成分，黄酮类 物质是大多数氧自由基的清除剂，对治疗冠心病、高血压等疾病有显 著效果，并且有抗菌消炎的作用；荷叶提取物在较低的浓度下即可显 示出非常强的抗氧化能力。生物碱有降血脂作用、抗自由基、抑制高 胆固醇血症和动脉硬化等药疗、食疗功效，而且还有较强的抑菌效果。

绞股蓝又名七叶胆、甘茶蔓、七叶参，是葫芦科绞股蓝属植物。 绞股蓝主要有效成分之一为绞股蓝总皂甙，有80余种。绞股蓝有“南 方人参”之称，其总皂甙含量是人参总皂甙的四倍，具有降血脂，降 血压，坑疲劳，抗衰老，促生长，防癌抗癌等功效。绞股蓝主要有效 成分之二是绞股蓝多糖，它具有SOD类似的活性，可清除超氧阴离 子(O^2-)和羟基自由基(OH)，据最近有关研究证实，绞股蓝多糖可抑制 肿瘤细胞的增殖，绞股蓝多糖无任何毒副作用，且能对抗化疗药物引 起的骨髓抑制等不良反应，保护细胞免受自由基的攻击，对机体的免 疫机能有一定的增强作用，并有抗氧化、抗衰老等作用。

目前，鲜少有将荷叶提取物和绞股蓝多糖应用于鱼类精液的冷冻 保存上。所以，本研究通过大量反复试验和剂量冷冻筛选，发现了荷 叶提取物和绞股蓝多糖在鱼类精液冷冻保护中具有显著的效果。

发明内容

有鉴于此，本发明旨在提出一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂， 以提高对异齿裂腹鱼精液的保护，减少冷冻过程中的活性氧对精子的 损伤。

为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种野生异齿裂腹鱼精液冷冻保护剂，由冷冻基础液、荷叶提取 物和绞股蓝多糖组成，所述荷叶提取物由包括如下步骤的方法制备得 到：

1)称取新鲜荷叶和干荷叶，并分别进行粉碎，将得到的新鲜荷 叶碎和干荷叶碎用纤维素酶预处理1-2h；

2)分别将处理后的新鲜荷叶碎和干荷叶碎按照料液比1:5-10加 入到高浓度乙醇溶液中常温浸泡3-6h，同时进行超声处理；

3)之后分别向浸泡有新鲜荷叶碎和干荷叶碎的溶液中加入纯化 水，使料液比达到1：20-30，常温下，超声处理6-12h；

4)将处理后的溶液浸提、减压浓缩后冻干，粉碎，得到新鲜荷 叶提取物和干荷叶提取物备用；

5)将新鲜荷叶提取物和干荷叶提取物按照重量份数比0.5-2:1混 合得到荷叶提取物。

进一步，所述冷冻基础液、荷叶提取物和绞股蓝多糖的重量份数 比为90-120:0.5-1:0.05-0.1。