[发明专利]盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法，包括以下步骤：(1)样品处理：盐酸多柔比星脂质体注射液采用破乳剂破乳后，稀释剂稀释，得待测样品液；(2)固相萃取：待测样品液经IC‑RP柱过滤，收集续滤液于样品管；(3)离子色谱检测：样品管上离子色谱检测，外标法计算后获得铵根含量。本发明方法操作简便、高效、成本低，方法还有专属性好、线性良好、重复性好、精确度高、灵敏度高的优点。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，特别涉及一种盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量 的测定方法。

背景技术

盐酸多柔比星脂质体是一种脂质体制剂，系将盐酸多柔比星包封于表面结合有甲氧基 聚乙二醇(MPEG)的脂质体中，可以保护脂质体免受单核巨噬细胞系统(MPS)识别，从而延长其在血液循环中的时间。

Doxil是目前应用最广泛的脂质体药物，已经被NCCN指南收录用于15种肿瘤的治疗。Doxil①采用硫酸铵梯度法主动载药，多柔比星与硫酸根在脂质体内相形成沉淀，该方法 包封率高，稳定性好，提高药物在肿瘤组织的蓄积；②采用PEG隐形技术，可以逃避RES吞噬，延长了脂质体药物在体内的循环时间；③选择挤出技术制备空白脂质体，粒度均一可控。

利用硫酸铵溶液作为水相，得到内外均为硫酸铵的脂质体，然后去除脂质体外水相的 硫酸铵，使脂质体内外的硫酸铵浓度形成浓度梯度，而硫酸铵梯度又是产生pH梯度的原动 力，即内水相的NH⁴⁺易分解为NH₃和H+，随着NH₃扩散到脂质体外相，H+被保 留在脂质体的内水相中，弱碱性药物进入内水相后，遇到酸性环境变成离子态，并与SO₄^2-形成硫酸盐沉淀，提高了脂质体的包封率。

铵根离子来源于关键辅料硫酸铵，在脂质体内外均存在，铵根的检测非常关键。现有 技术中盐酸多柔比星脂质体中铵根测定，采用ICP-MS法，曲拉通作为破乳剂，测定铵根的 总含量。ICP/MS不是常规仪器，对检测带来极大困难，成本高。曲拉通是一种表面活性剂， 容易产生气泡，对样品定容造成干扰，而且对色谱柱的伤害较大，成本高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐酸多柔比星脂质体注射液中铵根含量的测定方法，方法 操作简便、高效、成本低，方法还有专属性好、线性良好、重复性好、精确度高、灵敏度高 的优点。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

(1)样品处理：盐酸多柔比星脂质体注射液采用破乳剂破乳后，稀释剂稀释，得待测样品液；

(2)固相萃取：待测样品液经IC-RP柱过滤，弃去初滤液，收集续滤液于样品管；弃去初滤 液1ml，再开始收集续滤液；

(3)离子色谱检测：样品管上离子色谱检测，外标法计算后获得铵根含量。

IC-RP柱使用前，用5ml甲醇，低流速推注，后用10ml纯化水，低流速推注，平放20min， 待用。

作为优选，所述破乳剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、正丁醇、丙二醇、丙三醇中的一种。最优选甲醇作为破乳剂。

作为优选，所述稀释剂为纯化水。

作为优选，离子色谱检测的参数设置为：阳离子色谱柱Metrosep C6-150/4.0mm，淋洗 液为1.7mmol/L HNO₃+1.7mmol/L吡啶二羧酸，柱温：30℃±5℃，样品管温度：室温，流速：0.9±0.1ml/min，进样量20μL，运行时间：40min，稀释剂采用纯化水。

作为优选，步骤(1)样品处理具体为：精密移取盐酸多柔比星脂质体注射液1.0ml于50ml量瓶中，加入20ml破乳剂，振摇，破乳溶解(手动振摇30-60秒破乳)，再用稀释剂 稀释至刻度，摇匀；再移取5.0ml于25ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，得待测样品 液。