[发明专利]一种半连续培养法培育小球藻的方法

权利要求书

1.一种半连续培养法培育小球藻的方法，其特征在于，包括以下步骤：将小球藻接种到发酵罐中，不断添加补料，定期取出部分小球藻，保留部分小球藻培养液作为藻种继续培养，如此反复；所述小球藻发酵罐培养方式采用的是光能自养与无光照异养的混养方式，即利用一定时间的光能自养和一定时间的无光照异养，所述补料采用的是沼气工程的膜浓缩沼液与糖蜜。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述光能自养和无光照异样的时间为12h，所述补料在小球藻培养12-15h之后，每一分钟补料一次，少量多次，同时实时监控培养液PH，PH控制在7.0-8.0，并且在所述半连续培养法连续生产一个月后，当小球藻的的生长速度3天内达不到2.5×10⁶CFU/ml时则直接全部放罐，清洗发酵罐并空罐灭菌，准备开始第二批生产。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在接种到发酵罐之前，所述小球藻藻种需要纯化与活化，小球藻藻种的纯化使用的是稀释涂布平板法，纯化培养基采用的是BG-11固体培养基，藻种活化与扩培采用的是BG-11液体培养基，发酵罐基础培养基则采用的是小球藻异养培养基。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜浓缩沼液是对沼气工程产生的沼液进行多级沉淀、过滤、超滤、反渗透处理后获得的。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述糖蜜采用制糖厂的废糖蜜，对所述废糖蜜使用前处理如下：糖蜜用水稀释至30-40°BX，加0.2％-0.3％浓硫酸调节PH至3.5-4.0左右，静置沉淀3-5h后取上清，在通风厨加热煮沸1-1.5h，再次静置沉淀3-5h后取上清，加氢氧化钙调节PH至5.0-5.5左右，并加水稀释至30-40°BX，静置8-12h取上清并过滤，稀释1-2倍，检测其营养成分后备用。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜浓缩沼液和糖蜜均需要高温蒸汽灭菌后才能使用，其中，糖蜜在灭菌前需添加1.5-2.0g/L柠檬酸，0.005-0.01g/L硫酸亚铁，0.1-0.2g/L有机硅消泡剂。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述小球藻异养培养基成分为：葡萄糖20-30g/L，硝酸钠1.5-2.0g/L，磷酸二氢钾1.2-1.8g/L，七水硫酸镁1.2-1.5g/L，七水氯化钙0.02-0.05g/L，碳酸钠0.01-0.03g/L，柠檬酸三纳0.01-0.05g/L，膜浓缩沼液10-15g/L，泡敌0.1-0.2g/L，PH7.0-8.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有光照培养时，膜浓缩沼液流速1.8-2.2ml/min，糖蜜液流速0.2-0.4ml/min，无菌空气通气量为0.5-0.6m³/h，无光照培养时，膜浓缩沼液流速2.5-2.8ml/min，糖蜜液流速0.6-1.0ml/min，无菌空气通气量为0.6-0.8m³/h。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述膜浓缩沼液PH为8.22-9.01，糖蜜PH为5.0-5.5，所述发酵罐中培养液的PH调控以调控膜浓缩沼液流速为主。