[发明专利]一种基于体外消化/Caco2

权利要求书

1.一种基于体外消化/Caco2细胞模型测定冬虫夏草中砷的生物可给性方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)在厌氧条件下，将冬虫夏草粉末在模拟胃液中消化，得到胃消化液和残渣；

2)将所述残渣在模拟肠液中消化，得到肠道消化液；

3)吸弃Caco-2细胞模型的原有培养液，将所述肠道消化液加入到肠腔室中，将新鲜细胞培养液加入基底室，经细胞转化后，将得到的细胞培养液过膜，收集滤液进行电感耦合等离子体质谱分析，得到砷含量，计算砷的生物可给性。

2.根据权利要求1所述生物可给性方法，其特征在于，步骤3)中Caco-2细胞模型的建立方法，包括以下步骤：

将Caco-2细胞培养生长融合至80％以上时，用含质量浓度0.25％胰酶的EDTA溶液进行消化，调整细胞密度至3×10⁵～5×10⁵·mL^-1，接种于Transwell聚碳酸酯膜于24孔板中培养，待跨膜电阻大于200Ω·cm²时，得到Caco-2细胞模型。

3.根据权利要求1所述生物可给性方法，其特征在于，步骤1)中冬虫夏草粉末在模拟胃液中消化的方法为将冬虫夏草粉末在模拟胃液中恒温震荡，离心，取上清液浓缩，加入硝酸消解，得到消解液；

所述冬虫夏草粉末的质量和模拟胃液的体积比为0.5g：50mL。

4.根据权利要求1或3所述生物可给性方法，其特征在于，所述模拟胃液的配制方法为将1.25g胃蛋白酶、0.5g柠檬酸钠、0.5g苹果酸钠、420μL乳酸和500μL乙酸溶解后定容至1L，调节pH值至1.5。

5.根据权利要求1或3所述生物可给性方法，其特征在于，所述冬虫夏草粉末的粒径为50～80目。

6.根据权利要求1所述生物可给性方法，其特征在于，步骤2)中所述残渣在模拟肠液中消化的方法为将所述残渣在模拟肠液中恒温震荡，离心，取上清液浓缩，加入硝酸消解，得到消解液；

每0.5g冬虫夏草粉末得到的残渣用50mL模拟肠液处理。

7.根据权利要求1或6所述生物可给性方法，其特征在于，所述模拟肠液的制备方法为将0.5g胰酶和1.75g胆酸钠溶解后定容至1L，调节pH值至7.0。

8.根据权利要求1所述生物可给性方法，其特征在于，步骤3)中细胞转化是将分别添加有肠道消化液和新鲜细胞培养液的Caco-2细胞模型置于37℃、5％CO₂、相对湿度90％的环境中培养4h。

9.根据权利要求1、2、3、6和8所述生物可给性方法，其特征在于，步骤3)中所述细胞培养液为含体积浓度10％FBS的DMEM高糖培养液。