[发明专利]拉莫三嗪的检测方法

说明书

本发明提供了拉莫三嗪的检测方法，包括：制备具有拉莫三嗪和内标物的至少三种浓度的标准溶液，标准溶液中的内标物的量相同；利用液相色谱仪在检测条件下检测每一种标准溶液，获得标准溶液对应的第一检测结果；根据各个第一检测结果、标准溶液中拉莫三嗪的浓度和内标物的浓度，拟合拉莫三嗪的标准曲线方程；取待处理样品离心后的第一上清液；向第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入氢氧化钠溶液和萃取剂，对第一上清液进行萃取，得到待测样品；利用液相色谱仪在检测条件下检测待测样品，获得待测样品的第二检测结果；基于标准曲线方程和第二检测结果，得到待测样品中拉莫三嗪的浓度。本方案能够缩短样品检测时间。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及拉莫三嗪的检测方法。

背景技术

拉莫三嗪为苯基三嗪类化合物，可抑制兴奋性神经递质的释放和钠离子通道，为白色结晶性粉末，在水中不溶。

目前，检测样品中拉莫三嗪含量通常采用的方法为液相色谱法。而现有检测方法通常采用单一色谱柱进行检测，增加了等待色谱柱清洗的时间，从而导致样品检测时间较长。

发明内容

本发明提供了拉莫三嗪的检测方法，能够缩短样品检测时间。

为了解决上述问题，本发明实施例提供了拉莫三嗪的检测方法，包括：

制备至少三种浓度的标准溶液，其中，所述标准溶液为具有拉莫三嗪和内标物的溶液，所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同；

利用液相色谱仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液，获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果；

根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中拉莫三嗪的浓度和内标物的浓度，拟合拉莫三嗪的标准曲线方程；

对待处理样品进行离心处理，取离心后的第一上清液；

向所述第一上清液内加入内标物，涡旋混匀，顺次加入氢氧化钠溶液和萃取剂，对所述第一上清液进行萃取，得到待测样品；

利用液相色谱仪在所述检测条件下检测所述待测样品，获得所述待测样品的第二检测结果；

基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果，得到所述待测样品中拉莫三嗪的浓度。

优选地，为了更准确地检测出待测样品中拉莫三嗪的浓度，标准溶液和待测样品中的内标物均为盐酸普萘洛尔。

需要说明的是，第一上清液包括血清或血浆；萃取后选择为上层有机相。

具体地，可以通过下述步骤制备标准溶液：

(1)标准储备液的配制

精确称取拉莫三嗪标准品置于容量瓶中，用甲醇进行溶解，并定容至容量瓶标线，得到标准储备液，并在-80℃条件下保存。

(2)标准工作液的配制

取适量步骤(1)中标准储备液，用含有50％-70％甲醇的水溶液作为稀释液进行稀释混合，得到含有4-400μg/mL拉莫三嗪的标准工作液，并在-80℃条件下保存。

(3)内标储备液的配制

取内标物盐酸普萘洛尔标准品置于容量瓶中，用甲醇进行溶解，并定容至容量瓶的标线，得到内标储备液，并在-80℃条件下保存。

(4)内标工作液的配制

取步骤(3)中内标储备液，用含有50％-70％甲醇的水溶液作为稀释液进行稀释，得到含盐酸普萘洛尔的内标工作液，并在-80℃保存。

(5)标准溶液的标定