[发明专利]拉莫三嗪的检测方法在审
申请号: | 202011490828.1 | 申请日: | 2020-12-17 |
公开(公告)号: | CN112578051A | 公开(公告)日: | 2021-03-30 |
发明(设计)人: | 魏斌;贾永娟;倪君君 | 申请(专利权)人: | 北京和合医学诊断技术股份有限公司 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86 |
代理公司: | 济南信达专利事务所有限公司 37100 | 代理人: | 李世喆 |
地址: | 101111 北京市北京经济技术开发区经*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 拉莫三嗪 检测 方法 | ||
1.拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,包括:
制备至少三种浓度的标准溶液,其中,所述标准溶液为具有拉莫三嗪和内标物的溶液,所述至少三种浓度的标准溶液中的内标物的量相同;
利用液相色谱仪在预设的检测条件下分别检测每一种所述标准溶液,获得每一种所述标准溶液对应的第一检测结果;
根据各个所述第一检测结果、所述标准溶液中拉莫三嗪的浓度和内标物的浓度,拟合拉莫三嗪的标准曲线方程;
对待处理样品进行离心处理,得到离心后的第一上清液;
向所述第一上清液内加入内标物,涡旋混匀,顺次加入氢氧化钠溶液和萃取剂,对所述第一上清液进行萃取,得到待测样品;
利用液相色谱仪在所述检测条件下检测所述待测样品,获得所述待测样品的第二检测结果;
基于所述标准曲线方程和所述第二检测结果,得到所述待测样品中拉莫三嗪的浓度。
2.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述检测条件中的液相条件,包括:
洗脱流动相中的水相包括:含有40-100mM乙酸铵和0.1%-0.15%甲酸的水溶液;
洗脱流动相中的有机相包括:甲醇溶液;
柱温包括35-45℃;
流速包括0.85-1.25mL/min。
3.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述检测条件中的液相条件,包括:
采用双泵双柱检测模式,其中,
所述双泵双柱检测模式包括:主泵、副泵和两个色谱柱;
所述主泵和所述两个色谱柱中的一个色谱柱在对待测样品进行检测时,采用等度洗脱,洗脱流动相中的水相与有机相的体积比包括:47%:53%-56%:44%;
所述副泵用于对待测样品检测后的色谱柱进行清洗时采用梯度洗脱,洗脱流动相中的水相与有机相的体积比包括:
0.00min:0%:100%-10%:90%;
4.90min:0%:100%-10%:90%;
4.91min:47%:53%-56%:44%;
8.20min:47%:53%-56%:44%。
4.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述检测条件中的紫外检测条件,包括:
紫外检测器的检测波长包括:
0.00min:320nm;
4.70min:285nm;
8.20min:320nm。
5.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述标准曲线方程的两个变量分别为:所述标准溶液中拉莫三嗪的色谱峰面积与内标物的色谱峰面积的比值,以及所述标准溶液中拉莫三嗪的浓度与内标物的浓度的比值。
6.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述萃取剂包括:含有0-95%甲基叔丁基醚的乙酸乙酯溶液。
7.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述第一上清液与所述萃取剂的体积比为1:8-1:12中的任一比例。
8.根据权利要求1所述的拉莫三嗪的检测方法,其特征在于,
所述向所述第一上清液内加入内标物,涡旋混匀,顺次加入氢氧化钠溶液和萃取剂,对所述第一上清液进行萃取,得到待测样品,包括:
向所述第一上清液内加入内标物,在1500-2500rpm的转速下涡旋混合2-5min;
顺次加入氢氧化钠溶液,在1500-2500rpm的转速下涡旋混合2-5min,顺次加入萃取剂,在1500-2500rpm的转速下涡旋混合12-20min,并在10000-15000rpm的转速下高速离心5-12min,移取离心后的第二上清液;
利用氮气将移取的所述第二上清液吹干,顺次加入复溶液,在1500-2500rpm的转速下涡旋混合3-8min,并在10000-15000rpm的转速下离心5-12min,取离心后的第三上清液作为待测样品。
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